Тюнинг туран: Тюнинг Volkswagen Touran

Содержание

VOLKSWAGEN TOURAN — ЧИП-ТЮНИНГ

Автомобили марки VOLKSWAGEN TOURAN очень популярны в Европе и в России, являясь воплощением надёжности и комфорта. Чип тюнинг VOLKSWAGEN TOURAN может существенно повысить эксплуатационные характеристики этого автомобиля. За счет перепрограммирования блока управления двигателем (мотроника) Ваш VOLKSWAGEN TOURAN получит дополнительную мощности и крутящий момент.

Чип-тюнинг двигателя VOLKSWAGEN TOURAN

МОДЕЛЬ И ДВИГАТЕЛЬМОЩНОСТЬ (Л. С.)+ Л. С.КРУТЯЩИЙ МОМЕНТ (НМ)+ НМЦЕНА
VW Touran 1.2 TSI (Stage 1) [1197 см3]
До: 105
+22
До: 175
+43
звоните
После: 127После: 218
VW Touran 1.4 TSI (Stage 1) [1390 см3]
До: 140
+30
До: 220
+70
звоните
После: 170После: 290
VW Touran 1.4 TSI (Stage 1) [1390 см3]
До: 170
+45
До: 240
+60
звоните
После: 215После: 300
VW Touran 1.6 FSI (Stage 1) [1595 см3]
До: 102
+10
До: 148
+15
звоните
После: 112После: 163
VW Touran 1.6 FSI (Stage 1) [1595 см3]
До: 115
+10
До: 155
+15
звоните
После: 125После: 170
VW Touran 2.0 FSI (Stage 1) [1984 см3]
До: 150
+15
До: 200
+15
звоните
После: 165После: 215
VW Touran 1.6 TDI (Stage 1) [1598 см3]
До: 105
+30
До: 250
+60
звоните
После: 135После: 310
VW Touran 1.9 TDI (Stage 1) [1896 см3]
До: 90
+30
До: 210
+60
звоните
После: 120После: 270
VW Touran 1.9 TDI (Stage 1) [1896 см3]

До: 101
+30
До: 250
+70
звоните
После: 131После: 320
VW Touran 1.9 TDI (Stage 1) [1896 см3]

До: 105
+30
До: 250
+70
звоните
После: 135После: 320
VW Touran 2.0 TDI (Stage 1) [1968 см3]

До: 136
+30
До: 250
+60
звоните
После: 166После: 380
VW Touran 2.0 TDI (Stage 1) [1968 см3]

До: 140
+35
До: 250
+75
звоните
После: 175После: 395
VW Touran 2.0 TDI (Stage 1) [1968 см3]

До: 170
+35
До: 350
+70
звоните
После: 205После: 420
VW Touran 2.0 TDI (Stage 1) [1968 см3]

До: 177
+35
До: 380
+60
звоните
После: 212После: 440

Тюнинг фольксваген туран (62 фото)

Тюнингованный Фольксваген Туран

Touran Volkswagen обвес

VW Touran 2005 Tuning

VW Touran 2005 Tuning

VW Touran 2005 Tuning

Обвес на VW Touran 2008

Фольксваген Туран 1т2

Тюнингованный Фольксваген Туран

VW Touran 1.6

Фольксваген Туран r20

VW Touran Tuning

Фольксваген Шаран 2011

VW Touran 2005 Tuning

Фольксваген гольф Туран

Обыес Фольксваген Тоуран

VW Touran 2 Tuning

VW Touran Tuning

Volkswagen Touran 2005 обвес

VW Touran Tuning

Фольксваген Туран 2017

Фольксваген Туран кросс 2021

VW Touran 2005 обвес

Touran Tuning

Фольксваген Туран 2012 тюнинг

Volkswagen Touran 2005 обвес

VW Touran 2 Tuning

Volkswagen Touran stance

VW Touran Tuning

VW Touran 2005 обвес

VW Touran Tuning

Volkswagen Touran stance

VW Caddy Maxi stance

Volkswagen Touran 2004 диски

Volkswagen Touran 2004 тюнинг

Тюнингованный Фольксваген Туран

Туран черный тюнинг

Туран мк1

Диски VW Touran 2018-

Фольксваген Туран 2011 года

VW Touran 2008 r19

Фольксваген Туран кросс

VW Touran 2008 r19

VW Touran Tuning

Фольксваген Шаран Туран Туран

Volkswagen Touran 2008 r line

Фольксваген Туран r20

VW Touran 2.0 TDI cyrkuliacyja

Фольксваген Туран на 19 колесах

Volkswagen Touran на 18 дисках

Фольксваген Туран r20

Обвес Volkswagen Touran 2011

Фольксваген Туран 2005 r17

VW Touran стенс

Тюнинг VW Touran 2005

Диски 19 Volkswagen Touran

VW Touran mk1

Фольксваген Кадди 20 20

Hot Wheels Фольксваген Туран

VW Touran 2010 тюнинг

Volkswagen Touran 2004 диски

Volkswagen Touran 2005 обвес

Обвес VW Touran

Тюнинг Фольксваген Тоуран 2003-2015 аксессуары — бесплатная доставка по Украине

Аксессуары Фольксваген Тоуран 2003-2015

Автомобили Фольксваген Тоуран 2003-2015 – отражение легендарного немецкого качества за сравнительно доступные средства. На дорогах Украины автомобили Фольксваген встречаются часто. Что бы выделиться в потоке используют тюнинг, докупают разные аксессуары, внешний стайлинг.

Тюнинг VolksWagen Touran 2003-2015 позволяет:

  • придать авто индивидуальные черты внутри и снаружи, подчеркнуть оригинальный вкус собственника транспорта;
  • улучшить комфорт, безопасность водителя и пассажиров во время движения;
  • коврики текстильные в салон Avtm, Avto-gumm, Ciak, Pro-eco, Sotra, ЭкоКожа;
  • коврики резиновые в салон 3d-eva, Aileron, Avto-gumm, Eva, Frogum, Geyer & hosaja, Gledring, Guzu / doma, Lada locker — extruzion, Norplast, Novline, Petex, Petroplast, Rezaw plast, Seintex, Stingray, Weathertech и багажник Aileron, Avto-gumm, Frogum, Gledring, Lada locker — extruzion, Norplast, Novline, Rezaw plast, Sotra;
  • чехлы на авто: Avto mania, Elegant, Mw brothers, Virtus, АВ-Текс, Союз Авто;

На сайте Автошара — большой ассортимент авто товаров для тюнинга Фольксваген Тоуран 2003-2015. Можно улучшить внешний вид и внуреннний интерьер авто.

  • брызговики: Asp, Avtm, Lada locker — extruzion, Оригинал;
  • дворники на стекла : Oximo;
  • подлокотники в салон авто: Armster;
  • ветровики — дефлекторы окон: Avtm, Cobra tuning, Heko, Hic, Lavita, Vinguru;
  • мухобойки — дефлектор капота Fly, Heko, Rein, Vip tuning;
  • ветровики на стекла Avtm, Cobra tuning, Heko, Hic, Lavita, Vinguru;
  • защита двигателя Poligon, КОЛЬЧУГА;
  • подкрылки Avtm, Fps;
  • фаркопы Auto-hak, Galia, Hakpol, Poligon;
  • накладки на пороги и бампер Carmos, Nataniko;
  • багажники на крышу Amos, Terra drive, Thule, Десна Авто, Amos, Terra drive, Thule;
  • амортизаторы багажника Magneti marelli;

Фольксваген Тоуран 2003-2015 аксессуары цена в Автошаре:

Товар Цена
Коврики текстильные Volkswagen TOURAN с 2003-2010 серые в салон805 грн
Коврики текстильные Volkswagen TOURAN с 2003-2010 черные в салон805 грн
Коврики текстильные Volkswagen TOURAN с 2010-2015 серые в салон805 грн
Коврики текстильные Volkswagen TOURAN с 2010-2015 черные в салон805 грн
Ковры салона ворс Volkswagen Touran 2010-2015 5мест /Чёрные 5шт — AVTM1104 грн

Товары для автомобильного тюнинга в интернет-магазине Автошара

В магазине Автошара можете купить авто товары для VolksWagen Touran 2003-2015 по низким ценам, с бесплатной доставкой по Киеву и Украине.

Отключение ЕГР и чип тюнинг VW Touran 1.9L TDI BoschEDC16u34



Данный автомобиль приехал абсолютно исправным с просьбой отключить клапан ЕГР и сделать лёгкий тюнинг (stage 1). Так как дизельные автомобили с неисправной топливной системой или системой надува тюнинговать не целесообразно, была проведена диагностика топливной аппаратуры и турбины.

В диагностику входят следующие пункты:

  • Компьютерная диагностика (чтение кодов неисправностей всех систем)
  • Поверхностная проверка исправности топливной системы
  • Компьютерная проверка системы надува воздуха
  • Визуальный осмотр, проверка на посторонние шумы
  • Визуальная проверка дымности автомобиля

После того как убедились в исправности топливной аппаратуры можно приступать к считыванию заводской прошивки, для последующей модернизации. На данном автомобиле установлен блок управления двигателем  Bosch EDC16u34, поддерживающий чтение и запись через диагностический разъём. Однако было принято решение делать его в BSL режиме на столе. Эбу на данном автомобиле расположен в подкапотном пространстве, под жабо. 

 

Чтение и запись прошивки проводились на столе.

Клапан ЕГР был отключен как программно так и физический. Путем установки заглушки в канал рециркуляции отработавших газов.

Итоги: Автомобиль получил прибавку мощности порядка 15%, без повышения дымности и расхода топлива. А так же попрощался с возможными трудностями и неприятностями которые может доставить клапан ЕГР.

Более детальный отчет на этот и другие автомобили можно посмотреть на канале DimaMehanik Entertainment

Так же можно посмотреть отчёты, в группе Вконтакте

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:

Чип-тюнинг Фольскваген Туран (Volkswagen Touran): отзывы и цены

Не устраивает динамика Volkswagen Touran? С завода модель сильно задушена экологическими нормами, что проявляется в неадекватной реакции педали газа, провалах тяги, медленном наборе скорости. Устранить эти недостатки — задача прошивки Volkswagen Touran от АДАКТ.

Преимущества чип-тюнинга Фольксваген Туран

  • Улучшение эластичности и приемистости мотора;
  • Значительная прибавка тяги на низких оборотах;
  • Мгновенный отклик педали газа;
  • Устранение плавающих оборотов, вибрации мотора на холостом ходу;
  • Улучшение динамики при движении с работающим кондиционером;
  • Устранение провала при разгоне;
  • Оптимизация температурного режима ДВС;
  • Возможность программного отключения катализатора и других эко-систем.

Расход после чиповки Volkswagen Touran, как правило, остается на прежнем уровне. Если же начать ездить более динамично (у многих водителей после чипа появляется такое желание), соответственно вырастет и расход.

Гражданские тюнинг-прошивки не снижают ресурс мотора и трансмиссии, поскольку цель не максимальная производительность движка, а оптимизация калибровок, связанных с программными ограничениями в угоду экологичности.

Чтобы защитить автовладельцев от мошенников и нечестных мастеров, прошивки от АДАКТ сопровождаются специальным сертификатом. Его могут выдать только официальные партнеры компании.

Отзывы о чип-тюнинге Volkswagen Touran

Поделитесь опытом с другими водителями.

Оставить отзыв Volkswagen Touran

Привет всем автомобилистам. Поделюсь с вами отзывом об избавлении проблемы с ЕГР. После 3-лет езды на нашей солярке, пропала тяга, появились проблемы с запуском и загорелся check и пиктограмма свечи накала вместе с перечеркнутым знаком круизконтроля. После диагностики узнал причину — проблема с системой регенерации, т.е. с клапаном ЕГР. Изучил цены на новый клапан — от 125 у.е. за китайский, до 400 у.е. за оригинальный, плюс работы. Думал чистить, но это также решило проблему ненадолго. Решил его программно удалить. К наружным ,,спецам» не хотел обращаться, хотя это дешевле. Выбор после долгого изучения различных профильных сайтов и форумов пал на АРСАdact. В Витебске Михаил Чернов решил мою проблему. Время это заняло более 4-х часов (т.к. в моём Туране 2011 г.в. 1.6 tdi cayc блок ЭБУ simos (siemens) PCR 1.2 и с ним пришлось долго работать, был бы Bocsh, на 2 часа было бы быстрее. В результате, после программного удаления клапана ЕГР и сажевого фильтра, авто стало резвее, заводится лучше, пропали турбоямы. Расход снизилы процентов на 5. Спасибо Михаилу за кропотливую работу.

Чип-тюнинг Volkswagen Touran 2.0 tdi. Удаление сажевого фильтра и клапана ЕГР. Отчет

Произведен чип-тюнинг, удаление сажевого фильтра и клапана ЕГР на Volkswagen Touran с дизельным двигателем 2.0 tdi, мощностью 140 л.с., 2008, автоматическая коробка передач.

Двигатель Фольксваген Тоуран 2.0 тди управляется ЭБУ Bosch EDC 16 U31/34

В результате диагностики были помимо прочих обнаружены ошибки сажевого фильтра (DPF — Diesel Particulate Filter)

Прошивка данного ЭБУ двигателя Volkswagen Touran 2.0 tdi производится через диагностический разъем, который располагается под рулевой за откидывающейся пластиковой крышкой

В результате чип-тюнинга двигателя Volkswagen Touran 2.0 tdi повышается приемистость на низких оборотах, уменьшается задумчивость педали дроссельной заслонки и увеличивается максимальная мощность и крутящий момент двигателя в пределах 20-25%, а так же навсегда забываются проблемы с сажевым фильтром (внутренности удаленного фильтра на фото ниже) и клапаном рециркуляции отработанных газов — ЕГР (EGR)

Время работы по «чиповке» двигателя, программному удалению сажевого фильтра и ЕГР Фольксваген Тоуран 2.0 ТДИ дизельный двигатель — 1 час. Физическое удаление занимает около 3х часов и делается со снятием подрамника. Наша компания рекомендует после проведения этих работ сделать «сход-развал», т.к. углы установки колёс могут быть неточными

Модифицированная прошивка от компании «Лаборатория Скорости».

Стоимость работ можно узнать в разделе «Цены»

Подробно о ЕГР и сажевых фильтрах смотрите в роликах на нашем YouTube канале:

Чип-тюнинг Volkswagen Touran 2.0 TDI

Это один из самых успешных компактвэнов немецкого производства — Volkswagen Touran II. 2-е поколение чаще считают рестайлингом, но это не так: Touran уже построен на другой платформе (Volkswagen Golf 6) и, помимо визуальных изменений, имеет улучшенную аэродинамику и шумоизоляцию, новые опции и обновленную гамму моторов.

У нас в работе комплектация с дизельным турбированным двигателем с рабочим объемом 2.0 литра мощностью 110 л.с. и 250 Нм. Мотор имеет индекс CLCA и, помимо Volkswagen Touran, устанавливается на автомобили Skoda Octavia, Skoda Yeti, Volkswagen Caddy, Volkswagen Golf, Volkswagen Jetta.

На Фольксваген Туран 2.0 TDI установлен электронный блок управления двигателем Bosch EDC17C46, построенный на базе процессора TC1767. Чип-тюнинг проводим через разъем диагностики OBD2. Перед программированием обязательно делаем диагностику электронных систем на наличие ошибок неисправностей. Чтение программы управления через диагностический разъем на данном блоке невозможно. Для считывания прошивки требуется снятие и вскрытие контроллера, после чего подключение к контактной площадке на плате. Этот шаг мы пропускаем — в нем нет необходимости. Прошивка берется из официальных обновлений и конвертируется в нужный для нас формат для дальнейшей настройки. Запись новой прошивки длится не долго — около 5-10 минут.

Модифицированную прошивку подготавливаем на базе последнего обновления, исходя из технического сервисного бюллетеня (TSB). При настройке учитываются особенности двигателя и трансмиссии, чтобы исключить отрицательное влияние на их ресурс. В результате чип-тюнинга получается существенно увеличить мощность — порядка 60%. Да! 60%!! Никаких ошибок!!! На самом деле, все просто. Дело в том, что устанавливаемые на Volkswagen Touran двигатели 2.0 TDI, CLCA (110 л.с.) и CLCB (140 л.с.) абсолютно одинаковые и имеют одинаковую трансмиссию. Разница только в программном ограничении мощности. Мы смещаем ограничение по крутящему моменту до 140-сильной версии и дополнительно настраиваем программу, что позволяет достичь вышесказанного результата. В итоге, после чип-тюнига существенно улучшается динамика разгона во всем диапазоне оборотов. Появляется выраженный подхват при резких ускорениях. Улучшается отклик от нажатия педали акселератора. Сглаживаются всевозможные провалы и турбояма. Автомобиль в целом становится быстрее и собраннее. Время разгона с места до 100 км/ч сокращается на 3-4 секунды.

При неисправности клапана ЕГР, возможно его программное отключение. Стоит отметить, что если сам клапан плотно закрывается, то глушить его нет необходимости, он остается закрытым во всех режимах. Сажевый фильтр на данном двигателе отсутствует. Применяется только катализатор, удаление которого не сопровождается программным вмешательством.

В цифрах:
Было 110 л.с. ➡ Стало ~178 л.с.
Было 250 Нм. ➡ Стало ~377 Нм.

Результат:
Расчетный прирост мощности 62% к л.с. и 51% к крутящему моменту.

В данном случае прирост составил ~+68 л.с. ~+127 Нм.
Без снижения ресурса двигателя и без увеличения расхода топлива!

В результате значительно улучшена динамика разгона во всем диапазоне оборотов. Убраны провалы на старте и при переключении передач. Убраны ямы и провалы на самом разгоне, за счет чего движение и ускорение получается более мягким и эластичным. Режим кондиционирования при включении менее сказывается на потере мощности. Улучшена скорость реакции педали газа. В спокойных режимах езды возможно снижение расхода топлива. 

Также на данном автомобиле возможно:

  • Программное отключение клапана рециркуляции выхлопных газов (клапан ЕГР)

Перепрограммирование осуществляется через разъем диагностики.

Ориентировочное время работ 1 час.

Результат ощутим СРАЗУ!

публикаций | Birol Research Group

Индуцированный стробированием переход Мотта в NiS 2  
   Ezra Day-Roberts, Rafael M. Fernandes, Turan Birol
   Отправлено

Порядок заряда нарушает симметрию обращения времени в CsV , Рафаэль М. Фернандес, Туран Бирол, Зураб Гугучиа, Хубертус Луеткенс
   Отправлено [arXiv]

Два типа порядка заряда в сверхпроводящем материале кагоме CsV 3 Sb 5
Ritu Gupta, Debarchan Das, Charles Mielke III, Ethan Ritz, Fabian Hotz, Qiangwei Yin, Zhijung Tu, Hechang Gyjunong Туран Бироль, Рафаэль М.Фернандес, Зураб Гугучиа, Хубертус Люткенс, Рустем Хасанов
   Отправлено [arXiv]

Что контролирует электростатический и электрохимический отклик в материалах с электролитным управлением? Взгляд на критические факторы материалов
   Крис Лейтон, Туран Бирол, Джефф Уолтер
   Отправлено

Волновой порядок плотности заряда в металле кагоме AV 3 Sb 5 (A= Cs, Rb, K)
   Shangfei Wu, Brenden R. Ortiz, Hengxin Tan, Stephen D.Уилсон, Бинхай Ян, Туран Бироль, Гирш Блумберг
   Отправлено [arXiv]

Валентный переход при температуре, близкой к комнатной, в оксиде перовскита с настроенной деформацией Чарльтон, Майкл Р. Фитцсиммонс, Уильям М. Постиглионе, Эндрю Джейкобсон, Кэролайн Коростински, Джон Э. Дьюи, Хавьер Гарсия Барриоканал, Туран Бироль, К.Андре Мхоян и Крис Лейтон
   Отправлено [arXiv]

Контроль одноосной деформации объемного ферромагнетизма в титанатах редкоземельных элементов Д. Пелк
   Отправлено [arXiv]

Настраиваемая деформация метамагнитной критической конечной точки в изолирующих редкоземельных титанатах Мотта
Жентао Ван, Доминик Готро, Туран Бироль, Рафаэль М. Фернандес

64.Электроны зацикливаются в семействе сверхпроводников
   Мортен Х. Кристенсен, Turan Birol
   Nature 602 , 216 (2022) (Новости и мнения) [Журнал]

63. Теория волны зарядовой плотности в АВ 3 Sb 5 кагоме металлы
   Мортен Х. Кристенсен, Туран Бироль, Брайан М. Андерсен, Рафаэль М. Фернандес
   Физ. Ред. B 104 , 214513 (2021) [Журнал] [arXiv]

62. Выявление конкуренции между волной зарядовой плотности и сверхпроводимостью в CsV 3 Sb 5 посредством одноосной деформации
    Tiema Qian, Morten H.Christensen, Chaowei Hu, Amartyajyoti Saha, Brian M. Andersen, Rafael M. Fernandes, Turan Birol, Ni Ni
   Phys. Ред. B  104 , 144506 (2021) [Журнал] [arXiv]

61. Индуцированное свободными носителями сегнетоэлектричество в слоистых перовскитах
    Shutong Li, Turan Birol
   Phys. Преподобный Летт. 127 , 087601 (2021) [Журнал] [arXiv]

60. Прогнозирование двойных точек Вейля в сверхпроводнике на основе железа CaKFe 4 As 4
    Николас Хайнсдорф, Мортен Х.Кристенсен, Микель Ираола, Шанг-Шун Чжан, Фан Ян, Туран Бирол, Кристиан Д. Батиста, Розер Валенти и Рафаэль М. Фернандес
   Phys. Ред. B 104 , 075101 (2021) [Журнал] [arXiv]

59. Двухкомпонентное электронное фазовое разделение в легированном моттовском изоляторе Y 1−x Ca x TiO 3
, Гревен
    Физ. Ред. B 104 , 045112 (2021) [Журнал] [arXiv]

58.Надежная бесщелевая сверхпроводимость в 4Hb-TaS 2
Дэвид Дентельски, Эзра Дэй-Робертс, Туран Бироль, Рафаэль М. Фернандес, Джонатан Руман
Phys. Ред. B 103 , 224522 (2021) [Журнал] [arXiv]

57. Сегрегация легирующей примеси внутри и снаружи ядер дислокаций в перовските BaSnO 3 и реконструкция локальной атомной и электронной структуры
                                                                                        11 1 1 Хванхуи Юн, Абхинав Пракаш, Туран Бирол, Бхарат Джалан, К. Андре Мхоян
  21 , 4357 (2021) [Журнал] [arXiv]

56. Химическая связь и заряд Борна в 1T-HfS 2
Сабина Н. Нил, Шутонг Ли, Туран Бирол, Ян Мусфельдт
]

55. Первичная характеристика магнитных свойств Cu 2 (OH) 3 Br
   Dominique M. Gautreau, Amartyajyoti Saha, Turan Birol
   Phys.Преподобный мат. 5 , 024407 (2021) [Журнал] [arXiv]

54. Электронные корреляции в полупроводниковом полугейслеровом соединении FeVSb. Туран Бирол, Джейсон К. Кавасаки
    Phys. Ред. B 103 , 045134 (2021) [Журнал] [arXiv]

53. Металлический линейный дефект в широкозонном прозрачном перовските BaSnO 3
Хванхуи Юн, Мехмет Топсакал, Абхинав Пракаш, Бхарат Джалан, Чон Сок Чжон, Туран Бирол, К.Андре Мхоян
   Научные достижения  7 , eabd4449 (2021) [Журнал]

52. Подавление сегнетоэлектрического барьера переключения в гибридных несобственных сегнетоэлектриках
    Shutong Li, Turan Birol
   npj Comput. Матер. 6 , 168 (2020) [Журнал] [arXiv]

51. Каталитическая механика динамических поверхностей: методы стимулирования каталитического резонанса Кристофер, К.Даниэль Фрисби, Омар Абдельрахман, Пол Дауэнхауэр
   ACS Catal. 10 , 12666 (2020) [Журнал] [arXiv]

50. Анизотропные свойства, зарядовое упорядочение и ферримагнитные структуры в сильнокоррелированном β-V , Радж Чаклашия, Джаред М. Оллред, Стюарт Браун, Turan Birol, Ni Ni
   Phys. Преподобный мат. 4 , 094414 (2020) [Журнал] [arXiv]

49.Индуцированный напряжением ферромагнетизм в диамагнетике

48. Управление порядком катионов корреляций в двойном перовските Sr 2 VNbO 6
    Арпита Пол, Turan Birol
   Phys. Rev. Research 2 , 033156 (2020) [Журнал] [arXiv]

47.Сосуществование и взаимодействие спинонов и магнонов в антиферромагнетике с чередующимися антиферромагнитными и ферромагнитными квантовыми спиновыми цепочками
     
Х. Чжан, З. Чжао, Д. Готро, М. Рачковски, А. Саха, В.О. Гарлеа, Х. Цао, Т. Хонг, Х. О. Йешке, Субхендра Д. Маханти, Т. Бироль, Ф. Ф. Ассаад, X. Ке
   Phys. Преподобный Летт. 125 , 037204 (2020) [Журнал] [arXiv]

46. Напыленный Sr x NbO 3 в виде УФ-прозрачной проводящей пленки
    Джозеф Рот, Арпита Пол, Натан Голднер, Алексей Погребняков, Роман Агуеда, Натан Гольдер, Энгельм Агеда, Туранлем Бироль Приложение ACSМатер. Интерфейсы 12 , 30520 (2020) [Журнал]

45. SrNbO 3 как прозрачный проводник в видимом и ультрафиолетовом спектре
   Физика коммуникаций 3 , 102 (2020) [Журнал]

44. Мультиферроидное поведение в пленках EuTiO 3 , ограниченное симметрией
   P.Дж. Райан, Г.Э. Стербински, Ю. Чой, Дж. К. Войчик, Л., Чжу, Дж.С. Лян, Дж. Х. Ли, Д.Г. Шлом, Т. Бироль, С. Д. Браун, П. Б. Дж. Томпсон, П. С. Нормиле, Дж. Ланг, Дж.-В. Ким
   Физ. Ред. B 101 , 180409(R) (2020) [Журнал] [arXiv]

43. Контрастный ферромагнетизм в пирите FeS 2 Индуцированный химическим легированием по сравнению с электростатическим стробированием
   Ezra Day-Roberts, Turan Birol, Rafael M. Fernandes
   Phys. Преподобный мат. 4 , 054405 (2020) [Журнал] [arXiv]

42.Спин-решеточное взаимодействие и появление тримеризованной фазы в антиферромагнетике Кагоме S=1 Na 2 Ti 3 Cl 8
Arpita Paul, Chia-Min Chung, Turan Birol, Hitesh J. Changlani 90Phys. Преподобный Летт. 124 , 167203 (2020) [Журнал] [arXiv]

41. Инверсия основных носителей напряжения в ферромагнитном эпитаксиальном LaCoO 3-δ Тонкие пленки
, Мартин Гревен, К.Андре Мхоян, Туран Бирол и Крис Лейтон
    Phys. Преподобный мат. 4  034403 (2020) [Журнал]

40. Визуализация химии металла-MoS 2 Контакты в двумерных полевых транзисторах с атомарным разрешением Мэтью Нейрок, Андре К. Мхоян
   Phys. Преподобный мат. 3 111011(R) (2019) [Журнал]

39. Теория каталитического резонанса: супервулканы, каталитические молекулярные насосы и колебательный устойчивый режимнауч. Технол. 9 5058 (2019) [Журнал] [arXiv]

38. Спин-решетка и электрон-фононное взаимодействие в гибридном 3d/5d Sr 3 NiIrO 6
Кеннет Р. О’Нил, Арпита Пол, Амаль аль-Вахиш, Кендалл Д. Хьюи, Эйвери Блокмон Санг-Вук Чеонг, Вивьен Цапф, Крейг В. Топпинг, Джон Синглтон, Михаил Озеров, Туран Бироль и Дженис Л. Мусфельдт
                                                                                                                      4 ,  48 (2019) [Журнал]  [arXiv]

37. Деформационная настройка плазменной частоты в оксидах ванадата, ниобата и молибдата перовскита
     Арпита Пол, Turan Birol
   Phys.Преподобный мат. 3 , 085001 (2019)   [Журнал] [arXiv]

36. Применение DFT+DMFT в материаловедении
     Арпита Пол, Turan Birol
   Annu. Преподобный Матер. Рез. 49 , 31 (2019)   [Журнал] [arXiv]

35. Engineering SrSnO 3 Фазы и подвижность электронов при комнатной температуре с использованием эпитаксиальной деформации
Tianqi Wang, Abhinav Prakash, Yongqi Dong, Tristan Truttmann, Ashley Bucsek, Richard James, Dillon D.Фонг, Джонг-Ву Ким, Филип Дж. Райан, Хуа Чжоу, Туран Бирол, Бхарат Джалан
   Приложение ACS. Матер. Интерфейсы 10, 43802 (2018) [Журнал]

34. Спектроскопическое исследование мультиферроиков Ni под высоким давлением , Дженис Л. Масфельдт
   Phys. Ред. B  98 , 184101 (2018 г.) (предложение редактора) [Журнал]

33.Природа магнитных взаимодействий в Sr 3 NiIrO 6
Turan Birol, Kristjan Haule, David Vanderbilt
Phys. B 98 , 134432 (2018) [Журнал] [arXiv]

32. Стабильная и переключаемая электрическая поляризация в двух измерениях
Turan Birol
Природа 560 , 174 (2018) (Новости и обзоры) [Журнал]

31. Смягчение фононов из-за плавления ферромагнитного порядка в элементарном железе
   Qiang Han, Turan Birol, Kristjan Haule
   Phys.Преподобный Летт. 120 , 187203 (2018) [Журнал] [arXiv]

30. Формирование ионно-гелеобразующих, индуцированных кислородным вакансией в эпитаксиальном LA 0.5 SR 0,5 COO 3- & DELTA пленок от в операнде рентгеновское и нейтронное рассеяние
Джефф Уолтер, Biqiong Yu, Гуйчуан Ю, Александр Груттер, Брайан Кирби, Джули Борхерс, Чжан Чжан, Хуа Чжоу, Туран Бироль, Мартин Гревен и Крис Лейтон
   Phys. Преподобный мат. 1 , 071403(R) (2017) [Журнал]

29.Роль энтропии и структурных параметров в переходе спинового состояния LaCoO 3
Бисмаян Чакрабарти, Туран Бирол, Кристьян Хауле
Phys. Преподобный мат. 1 , 064403 (2017) [Журнал] [arXiv]

28. Фазовая стабильность и гигантская плоскостная анизотропия удельного сопротивления в сверхпроводнике на основе железа 112-го типа Ca 1−x La x FeAs 2
Chang-Jong Kang, TuranPhys 90, Gabriel Kotliar 90 . Ред. B 95 , 014511 (2017) [Журнал] [arXiv]

27.Исследование электромагнитной дисперсии методом неупругого рассеяния рентгеновских лучей в LiCrO 2
Шандор Тот, Бьорн Вехингер, Катарина Рольфс, Туран Бироль, Уве Штур, Хироши Такацу, Кента Кимура, Цуёси Кимура, Хенрик М. Роннов, Кристиан Рюэгг
. Комм. 7 , 13547 (2016) [Журнал] [arXiv]

26. Визуализация в атомном масштабе конкурирующих ферроидных состояний в слоистом оксиде Раддлсдена-Поппера
     Грег Стоун, Колин Офус, Туран Бирол, Джим Цистон, Че-Хуи Ли, Ке Ван, Крейг Дж.Фенни, Даррелл Г. Шлом, Насим Алем, Венкатраман Гопалан
   Нац. Комм. 7 , 12572 (2016) [Журнал]

25.

25. Оптическая спектроскопия и пробел диапазон гибридного неправильного сегнетоэлектрического CA 3 Ti 2 O
7

7

Judy G. Cherian, Turan Birol, Nathan C. вред, Bin Gao, пел , Дэвид Вандербильт, Дженис Л. Масфельдт 
   Прил. физ. лат. 108 , 262901 (2016) [Журнал]

24.Новый взгляд на «сегнетоэлектрические» металлы: фундаментальные механизмы и рекомендации по проектированию новых материалов
Николь А. Бенедек, Turan Birol
J. Mater. хим. C 4 , 4000 (2016) [Журнал] [arXiv]

23. Магнитоиндуцированное расщепление фононов в ACr 2 O 4 шпинели из первых принципов
    Александр Высоцкий, Turan Birol
   Phys. Ред. B 93 , 134425 (2016 г.) [Журнал] [arXiv]

22.Структурные и магнитные фазовые переходы в Ca 0,73 La 0,27 FeAs 2 со слоями FeAs, легированными электронами
                                                                                                                                  ). Шань Цзян, Чан Лю, Хуйбо Цао, Туран Бироль, Джаред Оллред, Вэй Тянь, Лиан Лю, Кюил Лю, Кюил Мэтью Крогстад, Джи Ма, Кит Таддей, Макарий Танатар, Мориц Хёш, Руслан Прозоров, Стефан Розенкранц, Ясутомо Уэмура, Габриэль Котляр, Ни Ни
   Phys. Ред. B 93 , 054522 (2016 г.) [Журнал] [arXiv]

21. Свободная энергия от стационарной реализации функционала DFT+DMFT
    Kristjan Haule, Turan Birol
   Phys.Преподобный Летт. 115 , 256402 (2015) [Журнал] [arXiv]

20. Управляемое проектирование сверхпроводников на основе оксисульфида меди
Чак-Хоу Йи, Туран Бироль, Габриэль Котляр
Europhysics Letters 111 , 17002 (2015) [Журнал] [arXiv9]

7

19. Рамановское исследование магнитных возбуждений и магнитоупругой связи в альфа-SrCr Роберт Дж.Кава, Туран Бирол, Хена Дас, Крейг Дж. Фенни
   Phys. Ред. B 91 , 144411 (2015) [Журнал] [arXiv]

18. J eff =1/2 Изолирующее состояние Мотта во фторидах Ir и Rh
     Turan Birol, Kristjan Haule
   Phys. Преподобный Летт. 114 , 096403 (2015) [Журнал] [arXiv]

17. Ряд чередующихся состояний с неполяризованными и спин-поляризованными полосами в димеризованном IrTe 2
  G.L.Pascut, T.Birol, M.Дж. Гутманн, Дж.Дж. Ян, С.-В. Чеонг, К. Хауле, В. Кирюхин
   Phys. Ред. B 90 , 195122 (2014 г.) [Журнал]

16. Влияние центральной моды и мягкого фонона на микроволновые диэлектрические потери вблизи деформационных сегнетоэлектрических фазовых переходов в Sr n+1 Ti n O 3n+1
Вероника Камба, Станислав Камба, Натан Орлофф, Туран Бироль, Че Хуи Ли, Дмитрий Нужный, Джеймс С. Бут, Маргитта Бернхаген, Райнхард Юкер, Даррелл Г.Schlom
    Физ. Ред. B 90 , 174105 (2014 г.) [Журнал]

15. Ковалентность в оксидах переходных металлов в рамках всеэлектронной динамической теории среднего поля Ред. B 90 , 075136 (2014 г.) [Журнал] [arXiv]

14. Индуцированная димеризацией межслойная квазидвумерность в металлическом иридате IrTe 2
 Г.Бомбарди, С. Артюхин, Т. Бироль, Д. Вандербильт, Дж.Дж. Ян, С.-В. Чеонг, В. Кирюхин
    Phys. Преподобный Летт. 112 , 086402 (2014) [Журнал] [arXiv]

13. Топологические поверхностные состояния и сверхпроводимость в [Tl 4 ](Tl 1-x Sn x )Te 3 Перовскиты
, PDC, Нил Бир И.Ф. , С. Чаттерджи, М. Учида, С. М. Купайе, Дж.-Дж. Wen, CJ Fennie, KM Shen, TM McQueen
   Phys.Преподобный Летт. 112 , 017002 (2014) [Журнал] [arXiv]

12. Структурный контроль магнитной анизотропии в мультиферроике EuTiO, управляемом деформацией 3 тонкая пленка
   X. Ke, T. Birol, R. Misra, J.-H. Ли, Б. Кирби, Д.Г. Шлом, С.Дж. Фенни, Дж.В. Фриланд
   Физ. Ред. B 88 , 094434 (2013 г.) [Журнал] [arXiv]

11. Происхождение гигантской спин-решеточной связи и подавление сегнетоэлектричества в EuTiO 3 из первых принципов
    Turan Birol, Craig J.Фенни
   Физ. Ред. B 88 , 094103 (2013 г.) [Журнал] [arXiv]

10. Использование размерности и устранение дефектов для создания настраиваемых диэлектриков для микроволновых излучений Ни, Майкл Д. Бигальский, Цзиншу Чжан, Маргитта Бернхаген, Николь А. Бенедек, Йонгсам Ким, Джоэл Д. Брок, Райнхард Юкер, ХХ Си, Лена Ф. Куркутис, Венкатраман Гопалан, Дмитрий Нужный, Станислав Камба, Дэвид А.Мюллер, Ичиро Такеучи, Джеймс С. Бут, Крейг Дж. Фенни, Даррелл Г. Шлом (*Равный вклад)
   Nature 502 , 532 (2013) [Журнал] [Новости и обзоры]

9. Влияние толщины пленки и деформации по двум осям на температуру Кюри EuO DG Schlom
   Прил. физ. лат. 102 , 062404 (2013) [Журнал]

8. Обратимое управление магнитными взаимодействиями электрическим полем в однофазном материале
   С.Дж. Райан, Дж.-У. Ким, Т. Бироль, П. Томпсон, Дж.-Х. Lee, X. Ke, P.S. Normile, E. Karapetrova, P. Schiffer, S.D. Brown, C.J. Fennie, D.G. Schlom
Nat. Комм. 4 , 1334 (2013) [Журнал] [arXiv]

7. Магнитоэлектрический эффект в оксидах переходных металлов: идеи и рациональный дизайн новых материалов из первых принципов , Эббетт, Ева Х. Смит, Саурабх Гош, Крейг Дж.Fennie (*Equal Contribution)
   Current Opinion in Solid State and Materials Science 16 , 227 (2012) (приглашенный доклад) [Journal] [arXiv]

6. Магнитодиэлектрическая связь и фононные свойства деформированных при сжатии тонких пленок EuTiO3, нанесенных на LSAT
 С. Камба, В. Гоян, М. Орлита, Д. Нужный, Дж.Х. Ли, Д.Г. Шлом, К. Рущанский, М. Лезаик, Т. Бироль, С. Дж. Фенни, П. Гемайнер, Б. Дхил, В. Бовтун, М. Кемпа, Дж. Глинка, Дж. Петцельт
  Phys.Ред. B 85 , 094435 (2012 г.) [Журнал] [arXiv]

5. Интерфейс управления возникающим ферроидным порядком в Ruddlesden-Popper Sr n+1 Ti n O 3n+1
Turan Birol, Nicole A. Benedek, Craig J. Pennie 9 0 0 Pennie. Преподобный Летт. 107 , 257602 (2011) (предложение редактора) [Журнал] [arXiv]

4. Фазовая диффузия q-деформированного осциллятора
Turan Birol, Ozgur Esat Mustecaplioglu
 Symmetry (Invited) 1 , 240 (2009) [Журнал]

3.Спиновый крутящий момент от туннелирования через примеси в магнитном туннельном переходе
Turan Birol, Piet W. Brouwer
Phys. Ред. B 80 , 014434 (2009 г.) [Журнал] [arXiv]

2. Влияние нулевой моды и тонкого спектра на время жизни атомных конденсатов Бозе-Эйнштейна

1. Времена жизни когерентности возбуждений в атомарном конденсате из-за тонкого спектра
     Turan Birol, Tekin Dereli, Ozgur Esat Mustecaplioglu, Li You
   Phys.Rev. A 76 , 043616 (2007) [Journal] [arXiv]

Обзор: фотореалистичный римейк «Короля Льва» от Disney поет новую, но знакомую мелодию технологии, было бы заманчиво сказать, что последний классический римейк Диснея — это не «Король Лев» вашего отца. За исключением того, что это так.

Помните, что это не обычная собственность, с которой имеет дело Дисней, это невероятно любимая история и коммерческая сила, которая настолько близка к неизбежности кассовых сборов.

Оригинальный анимационный фильм 1994 года не только получил два Оскара, но и заработал достаточно в прокате (более 400 миллионов долларов), чтобы стать фильмом № 1 с рейтингом G всех времен.

Затем было шоу на Бродвее, которое собрало шесть Тони, и до сих пор проводится 9000 представлений, и их число продолжает расти. Неудивительно, что практически первое, что режиссер Джон Фавро говорит в примечаниях к фильму, это: «Я чувствовал огромную ответственность за то, чтобы не облажаться».

Машина, специально созданная для поддержания кинематографического статус-кво, этот новый созданный компьютером «Король Лев» взял верную вещь и сделал ее еще вернее, принимая такие решения, как сохранение Джеймса Эрла Джонса и добавление Бейонсе Ноулз-Картер к озвучиванию и настолько близко к оригинальной версии, что дублирует как определенные изображения, так и строки диалога.

Но, несмотря на то, что он открывает новые горизонты визуального, а не драматического или эмоционального характера, это изысканное, приятное развлечение, которое чуть ли не заставляет вас смотреть в зубы дареному льву.

СВЯЗАННЫЕ: Премьера «Короля Льва»: даже Дональд Гловер перехитрил Бейонсе »

Нала (озвучивает Бейонсе Ноулз-Картер) и Симба (озвучивает Дональд Гловер) в «Короле Льве».

(Дисней)

Режиссер Фавро (по любопытному совпадению в карьере, в настоящее время он играет одну из главных ролей в новом «Человеке-пауке») делал подобные вещи раньше с «Книгой джунглей» 2016 года.(Роберт Легато и Адам Вальдес, получившие «Оскар» за этот фильм, работают над визуальными эффектами здесь.)

Этот новый фильм продвинул понятие цифровой среды и фотореалистичных животных, созданных компьютером, на шаг вперед, создав великолепные визуальные эффекты. (шестикратный номинант на премию «Оскар» Калеб Дешанель был оператором) и постарался создать ощущение, что все это было снято на камеру.

Это особенно верно в отношении животных, не только львов и других известных видов, но и множества различных видов птиц и зверей, которые выглядят и двигаются совершенно как живые.Вам практически нужен учебник по зоологии для колледжа, чтобы идентифицировать их всех.

Начав с исследовательской поездки в Африку, во время которой было сделано 12,3 терабайта фотографий (это очень много), команда «Короля Льва», в которую входят 130 аниматоров из 30 стран, усиленно работала над созданием ситуаций, в которых львы могли бы разговаривать друг с другом в случайных разговорах, которые выглядят вполне правдоподобно.

Одно из мест, где Дисней неизменно проявляет сообразительность, — это кастинг талантов озвучивания, в который, помимо Джонса и Бейонсе, входят такие известные имена, как Дональд Гловер, Чиветел Эджиофор, Элфри Вудард, Сет Роген и Джон Оливер, каждый из которых умело соответствует своей роли. .

Голоса также имеют значение в пении, где все знакомые музыкальные номера, от «The Lion Sleeps Tonight» до стандартов Тима Райса-Элтона Джона «Circle of Life», «Hakuna Matata» и «I Just Can’t Wait to Be King» от свежего продюсирования Фаррелла Уильямса с африканским вокалом и хоровыми аранжировками, спродюсированными Лебо М. Джоном, а Бейонсе поет свой новый «Spirit.Назвать нынешний фильм мюзиклом было бы не так уж и сложно.

СВЯЗАННЫЕ: С новыми версиями «Аладдина» и «Короля Льва» Disney сочетает в себе ностальгию и новизну »

Рафики (озвучивает Джон Кани) в «Короле Льве».

(Дисней)

Хотя этот фильм длиннее оригинала, он написан Джеффом Натансоном, по сути, это та же история, что и в оригинальном сценарии Ирэн Меччи, Джонатана Робертса и Линды Вулвертон.

Итак, снова все начинается с предзаголовка «Круг жизни», где лидер львиного прайда Муфаса (Джонс) и его подруга Сараби (Вудард) представляют собравшимся толпам своего новорожденного детеныша и будущего лидера Симбу.

Ключевыми игроками в ближайшем окружении Муфасы являются шаман-примат Рафики (Джон Кани) и красноклювая птица-носорог Зазу (Оливер, отпускающий некоторые из тех же шуток, что и Роуэн Аткинсон в оригинале), своего рода мажордом.

Примечательно отсутствие, как оказалось, ревнивого и склонного к манипулированию младшего брата Муфасы Шрама, льва, от которого вы точно не захотите отвернуться.

Мастерски реализующий эту ключевую роль Эджиофор, и хотя он менее театрально злой, чем анимационный Шрам в исполнении Джереми Айронса, он привносит в происходящее высокий уровень правдоподобия.

СВЯЗАННЫЕ: Сын Дональда Гловера не знал, что его отец был в «Короле Льве»

(Дисней)

После того, как Муфаса показывает юному Симбе (Дж. подруга Нала (Шахади Райт Джозеф) совершает еще одну ошибку.

Это будет блуждание по территории, контролируемой гиенами, не являющимися друзьями львов, и управляемой твердолобой Шензи (Флоренс Касумба) с Камари (Кигэн-Майкл Ки) и Азизи (Эрик Андре), создающими комическое облегчение.

Не из тех, кто учится на своих ошибках, Симба совершает еще одну, из-за которой он чувствует, что должен покинуть свой дом и даже желание остаться в живых.

От этого недуга его спас любимый всеми дуэт бородавочников и сурикатов, Пумба (Роген) и Тимон (Билли Эйхнер), невероятные и веселые друзья, которые убеждают Симбу, что девиз хакуна матата «не беспокойся» — это философия, которой он должен придерживаться. .

Подобно принцу Хэлу из шекспировского «Генриха IV» (вспомните Пумбу как Фальстафа), взрослый Симба (Гловер) может уклоняться от своих обязанностей только до тех пор, пока визит взрослой Налы (Ноулз-Картер) не исправит его .

Все это, конечно, знакомо каждому, кто видел либо анимационный фильм, либо бродвейский мюзикл (или и то, и другое), и в этом-то и суть. Объединив знакомый материал с расширяющей сознание технологией, «Король Лев» знает, как вас увлечь.

————

«Король Лев»

Рейтинг: PG за сцены насилия и опасностей и некоторые тематические элементы

Продолжительность: 1 час 58 минут

Играет: Открывается 19 июля в общем выпуске

TURAN и EVAN опосредуют рецепцию пыльцевых трубок в синергидах арабидопсиса посредством гликозилирования белков

Abstract

Рецепция пыльцевых трубок (ПТ) у цветковых растений описывает взаимодействие между мужскими и женскими гаметофитами после прибытия ПТ в синергидные клетки семязачатка.Это приводит к остановке роста PT, разрыву и высвобождению сперматозоидов и, таким образом, необходимо для обеспечения двойного оплодотворения. Здесь мы описываем TURAN ( TUN ) и EVAN ( EVN ), два новых члена пути рецепции PT, который опосредуется рецептороподобной киназой FERONIA (FER) (RLK). Подобно fer , мутации в этих двух генах приводят к чрезмерному росту PT внутри женского гаметофита (FG) без разрыва PT. Картирование с помощью секвенирования следующего поколения, цитологического анализа репортерных генов и биохимических анализов гликопротеинов в мутантах с нокдауном RNAi показало, что оба гена участвуют в N-гликозилировании белка в эндоплазматическом ретикулуме (ER). TUN кодирует белок суперсемейства уридиндифосфата (UDP)-гликозилтрансферазы, а EVN — долихолкиназу. В дополнение к их общей роли во время рецепции PT в синергидах, оба гена имеют разные функции в пыльце: в то время как EVN необходим для развития пыльцы, TUN необходим для роста и целостности PT, влияя на стабильность пыльцы. специфические гомологи FER ANXUR1 (ANX1) и ANX2. Репортеры ANX1- и ANX2-YFP не экспрессируются в пыльцевых зернах tun , но ANX1-YFP деградирует по пути ER-ассоциированной деградации (ERAD), что, вероятно, лежит в основе anx1/2 -подобного фенотипа преждевременного разрыва PT . мутанты tun .Т.о., как и при взаимодействии сперма-яйцеклетка животных, гликозилирование белков необходимо для взаимодействия между женскими и мужскими гаметофитами во время рецепции PT, чтобы обеспечить оплодотворение и успешное размножение.

Резюме автора

У цветковых растений гаметы образуются гаплоидными многоклеточными мужскими (пыльца) и женскими (зародышевый мешок) гаметофитами, которые развиваются в репродуктивных органах цветка. Успешное оплодотворение зависит от доставки сперматозоидов пыльцевой трубкой в ​​зародышевый мешок, встроенный в яйцеклетку.По прибытии пыльцевой трубки к отверстию семязачатка происходит взаимодействие между мужскими и женскими гаметофитами, известное как рецепция пыльцевой трубки; пыльцевая трубка замедляет или останавливает свой рост, затем возобновляет быстрый рост и, наконец, разрывается, высвобождая сперматозоиды и вызывая двойное оплодотворение. Хотя несколько членов пути рецепции пыльцевой трубки, включая рецептор-подобную киназу FERONIA, были идентифицированы, молекулярные механизмы, лежащие в основе этого процесса коммуникации, остаются неясными.Здесь мы показываем, что N-гликозилирование белка необходимо для нормальной рецепции пыльцевых трубок. Скрининг мутантов идентифицировал два гена, TURAN и EVAN , которые участвуют в N-гликозилировании белка в эндоплазматическом ретикулуме. Оба гена действуют в FERONIA-опосредованном пути рецепции пыльцевых трубок, который нарушен у этих мутантов. Таким образом, у растений для успешной рецепции пыльцевых трубок, по-видимому, необходима «система двойного узнавания», включающая взаимодействия как белковых, так и гликозильных остатков на поверхности мужских и женских гаметофитов, что концептуально похоже на взаимодействие сперматозоидов и яйцеклеток у млекопитающих. N-гликозилирование белков клеточной поверхности также играет важную роль.

Образец цитирования: Линднер Х., Кесслер С.А., Мюллер Л.М., Шимосато-Асано Х., Буассон-Дернье А., Гроссниклаус У. (2015) PLoS Биол 13(4):
е1002139.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139

Академический редактор: Zhenbiao Yang, Калифорнийский университет, Риверсайд, США

Получено: 29 января 2015 г.; Принято: 19 марта 2015 г.; Опубликовано: 28 апреля 2015 г.

Авторские права: © 2015 Lindner et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах документ и его вспомогательные информационные файлы.

Финансирование: Эта работа была профинансирована Цюрихским университетом, грантами Швейцарского национального научного фонда (SNF, 31003AB_126006 и 31003A_141245; www.snf.ch) для UG и частичная поддержка HL и LMM через исследовательские модули программ SNF ProDoc «Молекулярная наука о жизни» (PDFMP3_129948) и «Наука и политика растений» (PDFMP3_137058) соответственно для UG. Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Сокращения::
КонА,
конканавалин А; CRP,
полипептиды, богатые цистеином; Кр РЛК1Л,
Catharanthus roseus Подсемейство рецептороподобных киназ 1; ДАЭ,
дней после кастрации; ДАП,
дней после опыления; ДАПИ,
4′,6-диамидино-2-фенилиндол; ДЭФЛ,
дефензин-подобный белок; Дол-П,
фосфодолихол; эээ,
Ееарестатин I; ЭФР,
EF -Tu-рецептор; ЭндоХ,
эндогликозидаза Н; скорая помощь,
этанметилсульфонат; Скорая помощь,
эндоплазматический ретикулум; ЭРАД,
ER-ассоциированная деградация; ЭВН ,
ЭВАН ; ФА,
нитевидный аппарат; ФЭР ,
ФЕРОНИЯ ; ФГ,
женский гаметофит; ФЛС2 ,
FLAGELLIN-SENSITIVE2 ; ОФП,
зеленый флуоресцентный белок; глк,
глюкоза; GlcNAc,
N-ацетилглюкозамин; GPI,
гликозилфосфатидилинозитол; ГТ,
гликозилтрансфераза; ГУС,
β-глюкуронидаза; Киф,
кифунензин; ЖРД ,
ЛОРЕЛЕЙ ; ЛРР,
богатый лейцином повтор; Мужчина,
манноза; МЛО ,
ЛОКУС УСТОЙЧИВОСТИ К ПЛЕСЕНИ O ; НТА ,
НОРТИЯ ; ПТ,
пыльцевая трубка; РЛК,
рецептороподобная киназа; РНКи,
РНК-интерференция; РОС,
активные формы кислорода; СНП,
полиморфизм единичного нуклеотида; СРМ,
картирование отношения SNP; ТУН ,
ТУРАН ; УДП,
дифосфат уридина; ВТ,
дикий тип; YFP,
желтый флуоресцентный белок.

Введение

У цветковых растений мужские и женские гаметы входят в состав мужского (пыльца) и женского гаметофита (FG, зародышевый мешок). Сложная серия коммуникационных событий между мужским гаметофитом и женскими тканями цветка необходима для того, чтобы пыльцевая трубка (ПТ) доставила два неподвижных спермия в ФЗ [1]. Во время двойного оплодотворения каждый сперматозоид сливается с яйцеклеткой и центральной клеткой, образуя зародыш и эндосперм соответственно.Чтобы достичь FG, встроенного в семязачаток, PT прорастает через стигму, столбик и передающий тракт, входит в яичник и растет вдоль канатика к семязачатку. Градиенты различных небольших органических молекул [2,3], а также более крупные пептиды, продуцируемые синергидами [4], играют существенную роль в направлении PT к FG. Синергиды фланкируют яйцеклетку на микропилярном конце FG и секретируют LURE, малые дефензин-подобные белки (DEFL), которые образуют подгруппу богатых цистеином полипептидов (CRP) [4-6].В трансдукции этих женских сигналов в PT участвуют две рецептороподобные цитоплазматические киназы, LOST IN POLLEN TUBE GUIDANCE1 (LIP1) и LIP2 [7]. После прибытия PT в микропиле он растет за пределы нитевидного аппарата (FA), богатой мембранами структуры на микропилярном полюсе синергид, входит в рецептивную синергиду и разрывается, чтобы высвободить сперматозоиды [8]. Следовательно, взаимодействие между ПТ и синергидами может состоять из двух пространственно и во времени различных стадий. Первый из них представляет собой рецепцию PT в FA, где рост PT временно замедляется или останавливается, а второй включает быстрый рост в направлении места входа PT, разрыв PT и высвобождение двух сперматозоидов с сопутствующей гибелью рецептивной синергиды. 9].

FERONIA (FER), рецептороподобная киназа (RLK) подсемейства Catharanthus roseus рецептороподобная киназа 1 ( Cr RLK1L) [10,11], локализована в FA [12]. У мутантов, лишенных активности FER, развитие синергид нормальное, но fer (или sirene [13], что является аллельным) мутантные FG остаются неоплодотворенными даже PT дикого типа. Таким образом, мутант fer показал, что для приема PT необходим активный сигнальный процесс [10,12,13].В этих неоплодотворенных яйцеклетках PT входит в рецептивную синергиду, но не останавливает свой рост и не разрывается, чтобы высвободить сперматозоиды. Вместо этого рост PT продолжается внутри FG, что приводит к фенотипу чрезмерного роста PT [10,12,13]. Двумя ближайшими гомологами FER являются специфичные для пыльцы гены ANXUR1 ( ANX1 ) и ANX2 [14,15]. Одиночные мутанты anx1 и anx2 не имеют фенотипа, но двойные мутантные PT anx1/2 взрываются in vitro и in vivo вскоре после прорастания [14,15].Передача сигналов через белки ANX активирует НАДФН-оксидазы, которые продуцируют активные формы кислорода (АФК) [16]. Они точно настраивают градиент Ca 2+ на кончике PT, что приводит к устойчивой секреции материала мембраны и клеточной стенки, необходимого для устойчивого удлинения PT [16]. Однако по прибытии ПТ в ФГ ФЭР -зависимое накопление АФК вокруг ЖК приводит к разрыву ПТ [17]. Таким образом, два ANX RLK, по-видимому, обеспечивают целостность PT до его прибытия в FA, а активация FER -зависимого пути рецепции PT приводит к накоплению ROS и разрыву PT [14,15,17].

Недавно было показано связывание 5 кДа малого пептида RAPID ALKANIZATION FACTOR1 (RALF1) с FER в корнях, где это приводит к фосфорилированию H + -ATPase 2 плазматической мембраны, регулирующей удлинение клеток [18]. Однако остается неясным, связываются ли экспрессируемые пыльцой RALF-подобные белки с FER в синергидах и активируют ли каскад передачи сигналов рецепции PT. В дополнение к FER было показано, что следующие факторы играют роль в рецепции PT: LORELEI (LRE), синергид-экспрессируемый гликозилфосфатидилинозитол (GPI)-заякоренный белок [19] и NORTIA (NTA), локус O устойчивости к милдью. (MLO) белок семейства, который накапливается в FA FER -зависимым образом после прибытия PT [20].Мутанты lre-1/LRE и nta-1/nta-1 демонстрируют fer -подобный фенотип чрезмерного роста PT в 28% и 22% семязачатков, соответственно [19,20]. Более того, мутант воздержание по взаимному согласию ( amc ), который влияет на пероксин, участвующий в импорте белка в пероксисомы, проявляет fer -подобный фенотип только в том случае, если мутантные PTs контактируют с мутантными FGs [21]. Этот конкретный фенотип предполагает нарушение связи между обоими гаметофитами из-за отсутствия сигнальных молекул из пероксисом, возможно, АФК.Недавно были идентифицированы первые мужские гаметофитные факторы, влияющие на рецепцию ПТ [22,23]. PT тройного мутанта, нарушающего три фактора транскрипции MYB ( myb97-1 , myb101-4 и myb120-3 ), не могут разорвать и высвободить сперму в 60–70% целевых яйцеклеток [22,23] . Однако гены-мишени этих транскрипционных факторов, которые могут участвовать в передаче сигналов, еще предстоит идентифицировать.

Здесь мы описываем двух новых мутантов с нарушенной рецепцией PT, turan (tun) и evan (evn) .Интересно, что растения tun/TUN и evn/EVN демонстрируют один и тот же женский гаметофит fer -подобный фенотип чрезмерного роста PT, но имеют отчетливые дефекты пыльцы. В то время как мутантные пыльцевые зерна evn дегенерируют до созревания, мутантные зерна tun развиваются нормально, но PT лопаются сразу после прорастания in vitro, напоминая фенотип anx1/2 . TUN и EVN участвуют в N-гликозилировании белка в эндоплазматическом ретикулуме (ER) и кодируют предполагаемый белок суперсемейства уридиндифосфата (UDP)-гликозилтрансферазы и долихолкиназу соответственно.Мутанты не влияют на обилие и субклеточную локализацию слитых белков FER, NTA и LRE, указывая на то, что аберрантное гликозилирование может влиять на функцию по крайней мере одного из этих мембранных белков. В мутантных пыльцевых зернах tun ANX1, слитый с желтым флуоресцентным белком (ANX1-YFP), расщепляется по пути ER-ассоциированной деградации (ERAD). Это приводит к преждевременному разрыву PT, указывая на то, что ANX1/2 RLK являются мишенями TUN-зависимого N-гликозилирования.

Результаты

tun и evn Мутанты демонстрируют fer -подобный фенотип чрезмерного роста пыльцевых трубок

Чтобы лучше понять молекулярные механизмы, участвующие в рецепции PT у Arabidopsis , мы провели прямой генетический скрининг, который дал несколько мутантов, демонстрирующих fer -подобный фенотип чрезмерного роста PT.Три мутанта с самой высокой пенетрантностью были выбраны для дальнейшей характеристики, но два оказались аллельными друг другу (см. ниже). Как и fer , оба мутанта были названы в честь этрусских богинь плодородия и судьбы, а именно turan (tun) и evan (evn) [24]. У tun-1/TUN , evn-1/EVN и evn-2/EVN гетерозиготных мутантов 12% ( n = 1,318), 20% ( n = 1,2233) и ( n = 320) семязачатков остались неоплодотворенными, соответственно, по сравнению только с 1.5% ( n = 1,389) у растений дикого типа (табл. 1). В неоплодотворенных яйцеклетках PT продолжал расти внутри FG, не мог остановить его рост и не разрывался, чтобы высвободить сперматозоиды (рис. 1A–1C и S1C).

Рис. 1. Семязачатки tun и evn демонстрируют разрастание пыльцевых трубок и повышенное накопление каллозы в нитевидном аппарате.

(A–C) Окрашивание анилиновым синим каллозы в клеточных стенках PT через 2 дня после опыления (DAP). (A) Прием PT в FG дикого типа.Стрелка указывает место остановки роста PT. (B-C) Избыточный рост PT в tun-1 (B) и evn-1 мутантных FG (C). Звездочки указывают на чрезмерный рост PT. (D–F) Окрашивание β-глюкуронидазой (GUS) синергидного маркера ET2634 через 2 дня после кастрации (DAE) в диком типе (D), tun-1 (E) и evn-1 мутантных FG (F ). Стрелка указывает на аномальную структуру FA. (G – I) Очищение хлоралгидратом семяпочек 2 DAE у дикого типа (G), tun-1 (H) и evn-1 мутантов (I).Стрелки указывают на аномальную структуру FA. (J – L) Окрашивание анилиновым синим каллозы в срезах 6 мкм дикого типа (J), tun-1 (K) и evn-1 яйцеклеток 2 DAE (L). Прямоугольники представляют собой крупные планы указанных областей, при этом крупные планы мутантов в (K) и (L) были получены с уменьшенным временем воздействия по сравнению с диким типом (J). Масштабные линейки в A–F и J–L = 20 мкм; масштабные линейки в G–I = 10 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.g001

Чтобы гарантировать, что фенотип избыточного роста PT не был вызван дефектами клеточной спецификации у этих мутантов, синергидный маркер судьбы β-глюкуронидазы (GUS) (ET2634) был проанализирован.Как в мутантных семязачатках tun , так и в evn экспрессия GUS была ограничена синергидами (рис. 1D-1F), что указывает на то, что их идентичность не была затронута. Однако некоторые семязачатки показали аномальную структуру на микропилярном полюсе синергид (рис. 1Е). Для дальнейшего исследования этой структуры через 2 дня после кастрации (DAE) анализировали окрашивание мембран семяпочек, просветы и срезы. Хотя окрашивание мембран не выявило изменений в общей морфологии синергидов у мутантов (рис. S2 и данные S1), примерно 50% зрелых FG в просветленных яйцеклетках мутантов tun-1/TUN и evn-1/EVN показали аномальная структура в области ЖК (рис. 1G–1I).Используя окрашивание срезов семязачатков анилиновым синим, мы обнаружили, что примерно 50% зрелых FG демонстрируют повышенное отложение каллозы на микропилярном полюсе у обоих мутантов (рис. 1J-1L). Однако это не влияло на привлечение и рецепцию ПТ, так как все семязачатки могли привлекать ПТ, а более 60% мутантных ФГ были оплодотворены. Чтобы выяснить, является ли отложение каллозы в tun и evn FG индикатором защитного ответа [25], была протестирована экспрессия нескольких генов защитных путей растений в мутантных пестиках 2 DAE, но не наблюдалось повышения активности ( S3 рис).

Таким образом, мы идентифицировали два новых члена пути рецепции PT в синергидах, которые необходимы для успешного размножения. У обоих мутантов синергидная дифференцировка нормальная, но каллоза накапливается на микропилярном полюсе мутантных FG, что, однако, не опосредует нарушение рецепции PT.

tun и evn Мутанты демонстрируют дополнительные, но отчетливые дефекты мужского гаметофита

Самоопыление мутантных растений tun-1/TUN и evn-1/EVN дало только гетерозиготное потомство и потомство дикого типа.Попытки размножения мутантов путем скрещивания растений дикого типа с мутантной пыльцой также не дали мутантного потомства ( n = 96 растений на мутант; табл. 1). Эти результаты позволяют предположить, что у мутантов tun и evn поражен не только женский, но и мужской гаметофит. Для дальнейшего исследования этой гипотезы растения tun-1/TUN и evn-1/EVN были скрещены с квартетными мутантами ( qrt/qrt) [26, 27], где микроспоры не отделялись после мейоза. образуя тетрады пыльцевых зерен.Гетерозиготные мутанты на фоне qrt/qrt облегчают анализ дефектов пыльцы, поскольку в пределах одной тетрады две микроспоры несут аллель дикого типа и две — мутантный аллель. Эксперименты по прорастанию пыльцы in vitro показали, что у мутантов tun-1/TUN развитие пыльцы было нормальным, но 63% ± 1,5% ( n = 441) зрелых PT лопались сразу после прорастания по сравнению с 5% ± 5%. ( n = 128) у дикого типа (рис. 2А–2С и таблица 1). Этот фенотип пыльцы tun напоминает двойные мутанты, разрушающие ANX1/2 , специфичные для пыльцы гомологи FER [14,15].В отличие от дикого типа, где почти вся пыльца была интактной при созревании ( n = 600), 54% ± 5% ( n = 800) пыльцевых зерен дегенерировали перед созреванием у evn-1/EVN мутантов, что указывает на общие дефекты в развитии пыльцы (рис. 2D и 2E и таблица 1). Окрашивание 4′,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) на разных стадиях развития показало, что мутантная пыльца evn дегенерирует на ранней трехклеточной стадии ( n = 2,816; рис. 2E и рис. S4G).Мутантные пыльцевые зерна завершили второй митоз с образованием трехклеточной пыльцы, но сравнение с пыльцой дикого типа в пределах той же тетрады выявило в некоторых случаях задержку развития (рис. S4G). Таким образом, созревание пыльцы кажется нарушенным в пыльцевых зернах, лишенных активности EVN .

Рис. 2. Отчетливые дефекты пыльцы у мутантов tun и evn .

(A) Анализ прорастания пыльцы in vitro qrt/qrt пыльцевых зерен. (B) Анализ прорастания пыльцы in vitro tun-1/TUN; qrt/qrt пыльцы.Стрелки указывают разрыв PT. (C) График количества разрывов PT в пыльце qrt/qrt и tun-1/TUN; qrt/qrt . (D) Анализ прорастания пыльцы in vitro evn-1/EVN; qrt/qrt мутантной пыльцы. Стрелки указывают на выродившиеся пыльцевые зерна. (E) График количества дегенерирующих пыльцевых зерен на разных стадиях мутантов evn-1/EVN после окрашивания DAPI. Четвертая стадия относится к двуклеточным и ранним трехклеточным, третья стадия — к трехклеточным, вторая стадия — к поздним трехклеточным и ранним зрелым, а первая стадия — к стадии зрелой пыльцы.Шкала баров: 20 мкм. (F – G) Генная модель TUN (F) и EVN (G) с мутантными аллелями. Однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) этанметилсульфоната (EMS) обозначены линиями, вставки Т-ДНК — треугольниками.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.g002

Взаимные скрещивания между мутантами tun-1/TUN и evn-1/EVN с растениями дикого типа Col-0 показали, что fer -подобный фенотип чрезмерного роста PT был вызван дефектом женского гаметофита.В то время как мутантные семязачатки, оплодотворенные пыльцой дикого типа, демонстрировали fer -подобный фенотип чрезмерного роста PT, пестики дикого типа, опыленные пыльцой гетерозиготных мутантов, не показали фенотипа (S5 Fig), как и ожидалось, поскольку не образуются функциональные мутантные PT. Оба дефекта пыльцы evn и tun были полностью пенетрантными (т.е. влияли на жизнеспособность мужского гаметофита и рост PT соответственно) с эффективностью мужской передачи 0% ( n = 96 растений на мутант; таблица 1).Напротив, эффективность передачи самок была снижена до 74,5% ( n = 96) и 28% ( n = 96) у мутантов tun-1/TUN и evn-1/EVN соответственно (таблица 1). ).

В совокупности эти результаты показывают, что мутанты tun и evn демонстрируют отчетливые дефекты мужского гаметофита, влияющие на рост и жизнеспособность мужского гаметофита, соответственно. Однако аномальная рецепция PT вызвана дефектом женского гаметофита, что приводит к снижению передачи мутантных аллелей самкам.

TUN кодирует предполагаемую UDP-гликозилтрансферазу и EVN долихолкиназу

Для выявления причинных мутаций мы разработали картирование SNP-ratio (SRM) [28]. SRM позволяет картировать гетерозиготных мутантов с помощью секвенирования следующего поколения. Вкратце, коэффициенты сегрегации EMS-индуцированных SNP используются для идентификации причинных SNP, которые сегрегируют в соотношении 1:1 в мутантной популяции обратного скрещивания по сравнению с соотношением 1:3 для несцепленных SNP, сегрегирующих на фоне.

Применение SRM к мутантам tun-1/TUN выявило стоп-кодон в шестом экзоне At1g16570 (рис. 2F) [28], который кодирует предполагаемый белок надсемейства UDP-гликозилтрансфераз, принадлежащий к семейству гликозилтрансфераз (GT) 33 , из которых TUN является единственным членом Arabidopsis . У мутантов evn-1/EVN SRM идентифицировал стоп-кодон в одиннадцатом экзоне At3g45040 (рис. 2F и S6, рис. и S1, таблица), который кодирует единственную долихолкиназу в геноме Arabidopsis [29].Таким образом, и TUN , и EVN кодируют белки, которые, вероятно, играют роль в N-гликозилировании белков. В то время как EVN как единственная долихолкиназа может играть общую роль, TUN потенциально действует более специфическим образом, так как всего 27 семейств GT были идентифицированы у Arabidopsis . Наконец, второй аллель evn ( evn-2 ) был обнаружен в том же скрининге EMS и идентифицирован с помощью комбинации SRM (S7 Fig) и классического клонирования на основе карты (S1 Text).Этот аллель имеет преждевременный стоп-кодон в последнем экзоне и демонстрирует такой же разрастание PT (22%; n = 320) и пыльцевые фенотипы (50% ± 0%; n = 200), что и evn-1 (рис. 2F и Таблица 1 и S1C Фиг., S1G Фиг. и S7 Фиг. и S2 Рис.

Для подтверждения того, что были идентифицированы правильные гены, были проанализированы линии инсерций Т-ДНК, нарушающие их. Как описано ранее, аллель Т-ДНК tun-2 (SAIL_400_A01) имеет инсерцию в четвертом экзоне At1g16570 и демонстрирует фенотип избыточного роста PT (15%; n = 513; рис. 2F и таблица 1 и S1B рис.) [28] и разрыв PT in vitro (44% ± 6.5%; н = 404; Таблица 1 и S1F фиг.1) аналогичны аллелю EMS tun-1 , подтверждая правильную идентификацию TUN с помощью SRM. Аналогично, evn-3 (SAIL_529_E06) имеет инсерцию в восьмом экзоне At3g45040 и показывает ту же самку (28%; n = 337) и самца (50% ± 0%; n = 495). ) [29] фенотипы в виде мутантов EMS evn-1 и evn-2 (рис. 2G и таблица 1 и S1D, рис. и S1H, рис.).

Таким образом, TUN и EVN оба кодируют белки, потенциально участвующие в N-гликозилировании белков, что позволяет предположить, что правильное N-гликозилирование белков, участвующих в рецепции PT, имеет решающее значение для диалога гаметофитов во время рецепции PT.

TUN и EVN участвуют в N-гликозилировании белков, и их подавление вызывает различные вегетативные фенотипы

Гликозилирование

N-связанных белков происходит, когда белки проходят через ER [30]. Чтобы получить представление о субклеточной локализации белков TUN и EVN и подтвердить их идентичность с помощью функциональной комплементации, слияния нативный промотор: белок-зеленый флуоресцентный белок (GFP) трансформировали в мутантные растения. Конструкция pTUN::TUN-GFP дополняла как женский, так и мужской фенотипы (табл. 1).В семяпочках самый сильный сигнал GFP наблюдался в FG, включая синергиды, которые демонстрировали сигнал в форме кольца вокруг своих ядер и на всем протяжении PT (рис. S8A-S8C). Конструкция pEVN::EVN-GFP не проявляла экспрессии GFP и не дополняла фенотипы, что позволяет предположить, что конструкция не была функциональной в planta, вероятно, из-за отсутствия регуляторных элементов.

Исследования колокализации p35S::TUN-GFP и p35S::EVN-GFP , в которых слитые белки экспрессировались под конститутивным вирусным промотором 35 S , с различными субклеточными маркерами, были проведены на временно трансформированных луковицах и клетки эпидермиса табака.Они показали ER-локализацию обоих белков (S8D и S8E на фиг.), подтверждая потенциальную роль TUN и EVN в N-гликозилировании белка.

Поскольку гомозиготных мутантов выделить не удалось, мы использовали РНК-интерференцию (РНКи) для подавления экспрессии TUN и EVN с использованием промотора 35 S . Для дальнейшего анализа были выбраны четыре независимых линии TUN(RNAi) и EVN(RNAi) со значительно сниженной экспрессией, до 12% и 13% от уровней дикого типа, соответственно (S9 Fig и S1 Data).Чтобы исследовать функцию TUN и EVN в биохимическом анализе гликопротеинов, потенциальные изменения содержания гликопротеинов в нокдаунных проростках оценивали с помощью лектинового блоттинга с использованием конканавалина А (ConA), который в основном связывается с терминальными маннозильными и глюкозильными остатками гликопротеины. Оба проростка, TUN(RNAi) и EVN(RNAi) , показали измененное количество и подвижность гликопротеинов по сравнению как с диким типом, так и с ost3/6-2 , мутантом, разрушенным в субъединице олигосахарилтрансферазы, которая действует позже в путь гликозилирования (рис. 3) [31].

Рис. 3. ConA выявляет измененные структуры гликопротеинов в проростках TUN(RNAi) и EVN(RNAi) .

Лектин-блот с использованием ConA дикого типа, трех независимых линий TUN(RNAi) , двух независимых линий EVN(RNAi) и двух контрольных растений ost3/6-2 . Стрелки указывают на полосы дикого типа с различной численностью и/или подвижностью в линиях нокдауна, отмеченных звездочками. Фракция 55 кДа представляет контроль загрузки, окрашенный коммасси-бриллиантовым синим.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.g003

Кроме того, линии нокдауна TUN(RNAi) демонстрировали вегетативный фенотип, напоминающий мутанты fer/fer (рис. 4) [20,32]. . Тяжесть и частота карликового фенотипа коррелируют с уровнем экспрессии TUN в линиях TUN(RNAi) (фиг. 4C и 4G и фиг. S9). Проростки на чашках выглядели нормально, но в почве некоторые растения оставались маленькими, накапливали антоцианы и в конечном итоге погибали без дальнейшего роста (рис. 4С).Возможно, экспрессия TUN в этих проростках была очень низкой, но ее не удалось определить из-за ранней летальности. Эти результаты показывают, что TUN необходим для вегетативного развития. Напротив, растения с нокдауном EVN(RNAi) не демонстрировали явного фенотипа (рис. 4D и 4H и S9), что позволяет предположить, что низкие уровни EVN достаточны для поддержания нормального вегетативного роста.

Рис. 4. Линии TUN(RNAi) показывают fer -подобный вегетативно-карликовый фенотип.

(A–D) Размер растения 30-дневных сеянцев дикого типа (A), fer-2/fer-2 (B), TUN(RNAi) (C) и EVN (РНКи) линии (D). Звездочками обозначены проростка TUN(RNAi) , которые накапливают атоцианины и вырождаются без дальнейшего роста. (E–H) Размер взрослых растений дикого типа (E), fer-2/fer-2 (F), TUN(RNAi) (G) и EVN(RNAi) (H) растений . (F) Левое растение находится на той же стадии развития, что и особи дикого типа, TUN(RNAi) и EVN(RNAi) особи.Шкала баров: 1 см. Все линии находятся на фоне Col-0.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.g004

Взятые вместе, и TUN, и EVN играют роль в N-гликозилировании белка, но только TUN , по-видимому, необходим для нормального вегетативного роста и развития.

Понижающая регуляция

TUN не вызывает дегликозилирования FER

N-гликозилирование белка играет важную роль во многих процессах, включая фолдинг белка, стабилизацию белка, нацеливание на белок [33] и взаимодействие рецептор-лиганд [34].У мутантов tun мы наблюдали fer -подобный избыточный рост PT, fer -подобный вегетативный фенотип и anx1/2 -подобный разрыв PT. Белки FER, ANX1 и ANX2 имеют несколько предсказанных сайтов гликозилирования [11], что указывает на то, что TUN может быть вовлечен в специфическое гликозилирование этого подсемейства RLK. Чтобы выяснить, требует ли FER TUN для гликозилирования, конструкцию TUN(RNAi) трансформировали в растения, экспрессирующие трансляционный слитый белок pFER::FER-GFP .В случае полного отсутствия потенциальных N-гликанов, связанных с FER, можно было бы ожидать меньший размер недогликозилированного белка FER в проростках TUN(RNAi) по сравнению с диким типом [31]. Однако явных различий в размере, указывающих на потерю гликозилирования, не было обнаружено между FER-GFP в TUN(RNAi) и проростками дикого типа с помощью иммуноблот-анализа с использованием антитела против GFP (фиг. S10). Напротив, явный сдвиг в размере наблюдался, когда FER-GFP дегликозилировался эндогликозидазой H (EndoH, N-гликандегликозилазой с высоким содержанием маннозы) in vitro (рис. S10).

Эти данные свидетельствуют о том, что FER-GFP не полностью дегликозилирован в проростках TUN(RNAi) . Тем не менее, мы не можем исключить возможность того, что остаточные уровни активности TUN в линиях RNAi были способны частично гликозилировать FER в проростках, или что FER-GFP неправильно гликозилирован, а не дегликозилирован.

FER, NTA и LRE не локализованы неправильно в

tun и evn мутантных эмбриональных мешочках

Поскольку tun и evn демонстрируют fer -подобный разрастание PT, мы предположили, что стабильность и/или локализация известных женщин-игроков, участвующих в рецепции PT, могут быть нарушены в мутантных FG tun и evn .Поэтому репортерные конструкции FER-GFP, NTA-GFP и LRE-Citrine были введены в мутантные фоны tun и evn и проанализированы на предмет изменений в экспрессии и локализации. Во-первых, трансляционных слияния pFER::FER-GFP и pNTA::NTA-GFP были проанализированы в tun-2/TUN и evn-3/EVN siliques 2 DAE. В то время как было показано, что NTA-GFP локализуется в везикулоподобных структурах по всей цитоплазме до оплодотворения [20], FER-GFP локализуется в FA в синергидах [12].Ни NTA-GFP, ни FER-GFP локализация не были изменены у tun и evn мутантов (рис. 5A–5F и S11, рис. и данные S1), что указывает на то, что чрезмерный рост PT у tun и evn не вызван неправильной локализацией. ФЭР и НТА.

Рис. 5. NTA, FER и LRE показывают правильную локализацию в tun и evn мутантных зародышевых мешках.

(A–I) Конфокальный микроскопический анализ флуоресцентно меченных белков. (A–C) Локализация NTA-GFP, связанная с везикулами, в цитоплазме дикого типа (A), tun-2 (B) и evn-3 FG (C).(D–F) FER-GFP на ЖК и в мембранах спорофитной ткани дикого типа (D), tun-2 (E) и evn-3 FG (F). (G – I) Внеклеточная локализация LRE-цитрина в диком типе (G), tun-2 (H) и evn-3 FG (I). Шкала баров: 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.g005

Хотя для LRE не было доступно репортерного гена, кодирующего предсказанный GPI-заякоренный белок, гибридизация in situ показала экспрессию LRE преимущественно в синергидах до оплодотворение [19].Слитый белок LRE-GFP не давал обнаруживаемого флуоресцентного сигнала при транзиторных трансформациях [19], возможно, из-за воздействия на GFP кислого pH в апопласте. Однако LRE является хорошим кандидатом в качестве мишени для EVN, потому что дрожжевой мутант, соответствующий evn , secretory59 (sec59) , лишен GPI-заякоренных белков [35]. Поэтому мы получили LRE-репортер с использованием pH-стабильного флуоресцентного белка Citrine [36] и клонировали его между предсказанным сигнальным пептидом и GPI-якорем LRE [19].Слитый белок LRE-Citrine, локализованный на поверхности синергид, отличается от FA-локализации FER-GFP (рис. 5D и 5G). Т.о., LRE-Citrine, вероятно, обращена во внеклеточное пространство к микропиле, где рецепция PT инициируется по прибытии PT. Однако на продукцию и локализацию LRE-цитрина не повлияли мутанты evn и tun (рис. 5G–5I и данные S11, рис. и S1).

Таким образом, дефекты приема PT в tun и evn FG не вызваны неправильным выражением или неправильной локализацией FER, NTA и LRE.Однако возможно, что функция белка нарушена из-за ошибочно гликозилированных остатков, особенно в FER.

ANX1-YFP и ANX2-YFP не обнаруживаются в мутантных пыльцевых зернах

tun

Чтобы выяснить, вызван ли фенотип PT-всплеска tun изменениями содержания и/или локализации белка ANX1/2, мы трансформировали мутанта tun-2/TUN;qrt/qrt с помощью pACA9::ANX1-YFP . и pACA9::ANX2-YFP соответственно, и скрещивали tun-2/TUN;qrt/qrt с растениями, экспрессирующими pACA9::ANX1-YFP [16].Мы проанализировали четыре независимые линии, гомозиготные по трансгену pACA9::ANX1-YFP (поколение T2 или F2), и две независимые линии, гемизиготные по трансгену pACA9::ANX2-YFP (поколение T1) и гетерозиготные по tun-2. соответственно. Хотя мутанты tun-2/TUN были гомозиготными по pACA9::ANX1-YFP , мы всегда обнаруживали экспрессию ANX1-YFP только в двух пыльцевых зернах на тетраду (рис. 6A–6C). Однако в сегрегантах дикого типа можно было наблюдать флуоресценцию гомозиготного pACA9::ANX1-YFP (фиг. 6А).Кроме того, мутанты tun-2/TUN , гемизиготные по pACA9::ANX2-YFP , показали только 30,2% ± 0,7% ( n = 156 тетрад) флуоресцентных пыльцевых зерен по сравнению с 50% ± 0% ( n ). = 150 тетрад) в тетрадах дикого типа. Поскольку под эпифлуоресцентным микроскопом подсчитывали только флуоресцентные тетрады, уменьшение на 50% флуоресценции гемизиготного репортера привело бы к 33,3% флуоресцентных пыльцевых зерен.

Рис. 6. Флуоресценция ANX1-YFP не обнаруживается в мутантных пыльцевых зернах tun .

(A–D) Конфокальный микроскопический анализ экспрессии ANX1-YFP под специфичным для пыльцы промотором. (A) Экспрессия ANX1-YFP в TUN/TUN;qrt/qrt;ANX1-YFP/ANX1-YFP (сегреганты дикого типа, гомозиготные по репортерному гену). (B) Экспрессия ANX1-YFP в TUN/TUN;qrt/qrt;ANX1-YFP/- (сегреганты дикого типа, гемизиготные по репортерному гену). (C) Экспрессия ANX1-YFP в tun-2/TUN;qrt/qrt; мутантных тетрадах ANX1-YFP/ANX1-YFP .Стрелки указывают на отсутствие флуоресценции в пыльцевых зернах tun . (D) Экспрессия ANX1-YFP в tun-2/TUN;qrt/qrt; мутантные тетрады ANX1-YFP/ANX1-YFP после обработки кифунензином (Kif). (E) Экспрессия ANX1-YFP в мутантных тетрадах tun-2/TUN;qrt/qrt;ANX1-YFP/ANX1-YFP после имитационной обработки для сравнения уменьшения интенсивности флуоресценции. (F–H) Экспрессия ANX1-YFP в tun-2/TUN;qrt/qrt;мутантные тетрады ANX1-YFP/ANX1-YFP после обработки Eeyarestatin I (EerI).(F) 10 мкм EerI восстанавливает флуоресценцию ANX1-YFP в пыльцевых зернах tun . (G) Более высокие концентрации EerI могут привести к цитозольным включениям (звездочка) или взрыву пыльцевых зерен (стрелка). (H) Восстановление флуоресценции ANX1-YFP в нескольких tun-2/TUN;qrt/qrt; мутантных тетрадах ANX1-YFP/ANX1-YFP после обработки EerI. Остаточный флуоресцентный сигнал от пыльцевой оболочки является аутофлуоресценцией. Шкала баров: 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.g006

Таким образом, ANX1-YFP и ANX2-YFP не обнаруживаются в мутантных пыльцевых зернах tun , возможно, потому, что они подвергаются ERAD неправильно свернутых белков [ 37].Действительно, обработка кифунензином (Kif), ингибитором пути ERAD [38], приводила к восстановлению флуоресценции ANX1-YFP в пыльцевых зернах tun (рис. 6D). Поскольку результаты лечения Kif были переменными, вероятно, в зависимости от того, насколько хорошо препарат поглощался в разных экспериментах, мы также использовали ингибитор ERAD Eeyarestatin I (EerI) [39], что привело к более последовательному восстановлению флуоресценции ANX1-YFP. (Рис. 6F–6H и рис. S12 и данные S1). Эти результаты показывают, что преждевременный выброс tun PT вызван отсутствием ANX1 и ANX2.

Таким образом, TUN , по-видимому, участвует в гликозилировании ANX1-YFP и ANX2-YFP, а аберрантное гликозилирование этих слитых белков приводит к их деградации по пути ERAD. Однако, хотя и менее вероятно, мы не можем исключить, что белки ANX1/2-YFP деградируют, потому что другой белок, необходимый для их стабильности, неправильно гликозилирован и подвержен пути ERAD.

Обсуждение

TUN и EVN Кодируют белки раннего пути N-гликозилирования

В этом исследовании мы охарактеризовали двух мутантов, tun и evn , выделенных при скрининге дефектов рецепции PT.Они имеют сходные фенотипы чрезмерного роста PT в FG, но играют разные роли во время развития пыльцы, целостности PT и вегетативного роста. Оба гена кодируют белки, участвующие в гликозилировании N-сцепленных белков, что указывает на то, что эта котрансляционная модификация белков необходима для различных процессов развития.

N-связанное гликозилирование влияет на фолдинг, стабильность, транспорт и активность белка [40]. Это многостадийный процесс, начинающийся со сборки олигосахарида, содержащего N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), маннозу (Man) и глюкозу (Glc), на фосфорилированном связанном с мембраной полиизопреноидном липидном носителе, долихоле [30].Сборка начинается на цитозольной стороне и заканчивается на люменальной стороне ER с образованием конечного продукта Glc 3 -Man 9 -GlcNAc 2 [30]. Второй этап – котрансляционный перенос олигосахарида на аспарагин в последовательности Asn-X-Ser/Thr, где X может быть любой аминокислотой, кроме пролина [41]. Последним этапом является контроль качества, связанный с ЭР, который обеспечивает правильную укладку N-гликозилированных белков и их последующий выход из ЭР [37].

EVN кодирует долихолкиназу, которая играет раннюю роль в пути N-гликозилирования [29].Долихолкиназа SEC59 в дрожжах катализирует цитидин-трифосфат-зависимое фосфорилирование долихола, связанного с мембраной ER [35]. Поскольку EVN может комплементировать мутанту дрожжей sec59 , он, по-видимому, выполняет ту же биохимическую функцию [29]. Фосфорилированный долихол (Dol-P) служит носителем для сборки олигосахаридов на цитозольной стороне ЭР и, кроме того, носителем моносахаридов Man и Glc в просвете ЭР для синтеза GPI-якоря. В Arabidopsis , EVN является единственной копией гена с охарактеризованными ортологами у дрожжей [42], млекопитающих [43,44] и человека [45], где дефицит долихолкиназы приводит к гипогликозилированию и летальности [46,47].Мы никогда не получали гомозиготных мутантов для evn из-за его полной летальности мужского гаметофита. Поскольку растения с нокдауном EVN(RNAi) не проявляют какого-либо явного вегетативного фенотипа, низкой остаточной генной активности может быть достаточно для нормального роста растений.

TUN кодирует предполагаемый белок суперсемейства UDP-гликозилтрансфераз, принадлежащий к семейству 33 GT, из которых TUN является единственным представителем Arabidopsis . Дрожжевой ортолог ALG1 кодирует бета-1,4-маннозилтрансферазу, которая переносит первый Man с субстрата GDP-D-Man на акцептор Dol-PP-GlcNAC 2 на цитозольной стороне ЭР [48, 49].ALG1 находится в мембране ER, образуя гомодимеры и гетеродимеры с ALG2 и ALG11 соответственно [50]. В непермиссивных условиях чувствительные к температуре мутанты alg1-1 ​​ не продуцируют Man-содержащие олигосахариды [48], что приводит к летальности [51]. Что касается evn , гомозиготные мутанты tun не были выделены из-за полной летальности мужского гаметофита. Однако сильный карликовый фенотип и погибающие проростки в линиях TUN(RNAi) указывают на то, что TUN также необходим для вегетативного роста и развития.У растений важность N-гликозилирования белков во время эмбриогенеза, вегетативного развития и защиты растений была продемонстрирована различными фенотипами мутантов N-гликозилирования [52].

Субклеточная локализация слитых белков TUN и EVN в ER и измененные паттерны гликопротеинов, наблюдаемые в линиях РНКи для обоих генов, указывают на то, что растительные белки играют сходную роль в гликозилировании белков, как и их дрожжевые ортологи.

Локализация известных членов рецептивного пути пыльцевой трубки не затрагивается у

evn и tun синергид

Мы показали, что мутации в EVN и TUN в FG приводят к дефектам рецепции PT.Из-за локализации их белков в ER, вполне вероятно, что EVN и TUN напрямую не опосредуют взаимодействия мужского и женского гаметофитов во время рецепции PT, но что нарушенный путь гликозилирования влияет на функцию женских игроков, участвующих в этом процессе. Однако локализация слияний трансляционных репортерных генов с FER, NTA и LRE, тремя известными компонентами пути рецепции PT, не изменилась в FG растений evn-3/EVN и tun-2/TUN . Это неудивительно для NTA-GFP, у которого нет предсказанных сайтов гликозилирования.Однако ожидалось, что флуоресценция LRE-Citrine будет снижена или даже отсутствовать в мутантных семязачатках evn , поскольку мутант дрожжей sec59 обеднен GPI-заякоренными белками [35]. Однако EVN и SEC59 демонстрируют лишь 22% идентичности аминокислот (ClustalW). Хотя растительный белок способен дополнять мутант дрожжей sec59 [29], эти два белка могут не играть одинаковых ролей в planta и/или другие, неописанные киназы могут взять на себя функцию EVN в мутантных растениях.

Однако нормальное содержание белка и его локализация не обеспечивают должного функционирования. Тот факт, что мутанты tun демонстрируют fer -подобный избыточный рост PT, fer -подобный вегетативный фенотип и anx1/2 -подобный разрыв PT, предполагает, что FER и ANX1/2 RLK затронуты у этого мутанта. . FER имеет девять предполагаемых сайтов N-гликозилирования, восемь из которых находятся во внеклеточном малектин-подобном домене [11]. У Xenopus laevis малектин представляет собой ER-локализованный лектин, который избирательно связывает углеводы и участвует в ER-контроле качества гликопротеинов [53,54].Внеклеточный гликозилированный малектин-подобный домен FER предполагает, что его лиганд может содержать остатки сахара и/или что правильное гликозилирование этого домена необходимо для связывания лиганда. Однако потенциальные дефициты белкового гликозилирования в tun и evn мутантных FG не влияли на полярную локализацию FER-GFP в FA, а подавление TUN не вызывало полной потери N-связанных гликанов в FER-GFP в рассаде. Но возможно, что отсутствуют только некоторые N-гликаны или изменен состав N-гликанов.Следовательно, хотя локализация FER-GFP не затрагивается, могут быть затронуты такие функции, как связывание и/или распознавание лиганда и последующая передача сигнала. Было показано, что это относится к лейцин-богатому повтору (LRR) растительного иммунитета RLK EF -Tu рецептора (EFR), который демонстрирует нарушение связывания лиганда вследствие недостаточного гликозилирования [34]. Совсем недавно в корнях было показано связывание малого пептида RALF1 массой 5 ​​кДа с FER [18]. Однако RALF1 не экспрессируется ни в PT, ни в синергидных клетках.Но в растении имеется 34 RALF-подобных пептида с различными паттернами экспрессии [18]. В случае RALF1 N-гликозилирование, по-видимому, не играет роли в связывании FER, поскольку в процессированном пептиде отсутствует какой-либо предсказанный сайт N-гликозилирования. Из семи RALF-подобных пептидов с высокой экспрессией в пыльце, RALF-подобный4 и RALF-подобный26 являются единственными двумя с предсказанным сайтом N-гликозилирования. Вполне возможно, что, в отличие от животных [53, 54], малектин-подобный лиганд-связывающий домен FER не имеет консервативной способности связывать углеводы у растений.Вместо этого состояние гликозилирования лиганд-связывающего домена рецептора может быть более важным, чем гликозилирование лиганда.

Получение PT в FA необходимо для двойного оплодотворения и, следовательно, успешного воспроизводства. Вполне возможно, что существует «система двойного распознавания», где белковый остов рецептора необходим для взаимодействия с лигандом, которые дополнительно усиливаются N-связанными гликанами, тем самым увеличивая шансы на успешную рецепцию ПТ.Такая система двойного распознавания была описана для взаимодействия гамет у млекопитающих [55], где гликопротеин mZP3 во внеклеточном матриксе яйцеклетки, zona pellucida, отвечает за связывание сперматозоидов [56]. В то время как связывание сперматозоидов улучшается гликозилированными белками mZP3, негликозилированные mZP3 также могут связывать сперматозоиды. Соответственно, белок спермы или белковый комплекс взаимодействует с гликанами и/или белковым остовом mZP3 в зависимости от состояния его гликозилирования. Таким образом, эта система двойной адгезии обеспечивает лучшее связывание сперматозоида с яйцеклеткой, но позволяет взаимодействовать с гаметами, даже если состав гликанов нарушен, увеличивая вероятность успешного оплодотворения [57].У растений существование такой системы двойного распознавания может объяснить пониженную пенетрантность фенотипа чрезмерного роста PT у tun и evn , поскольку женский белковый компонент, даже если он не гликозилирован должным образом, все еще может частично распознавать мужской лиганд. Несмотря на сходство фенотипов fer и tun , необходимы дальнейшие биохимические исследования, чтобы выяснить, действительно ли FER RLK и/или другие компоненты пути рецепции PT затронуты у мутанта tun .

ANX1-YFP подвергается деградации по пути ERAD в пыльцевых зернах

tun

Помимо общих фенотипов с fer , tun также проявляет anx1/2 -подобный разрыв PT. ANX1 и ANX2 имеют семь и четыре потенциальных сайта N-гликозилирования соответственно [11], при этом все четыре предсказанных сайта гликозилирования ANX2 расположены во внеклеточном домене и сохраняются в ANX1. Флуоресценция ANX1-YFP и ANX2-YFP не обнаруживается в мутантных пыльцевых зернах tun-2 , но флуоресценция ANX1-YFP восстанавливается после обработки двумя ингибиторами ERAD.Это открытие предполагает, что ANX1-YFP неправильно гликозилирован в пыльцевых зернах tun и, следовательно, деградирует с помощью пути ERAD, который индуцируется, когда сворачивание N-гликан-зависимого белка не удается [37]. Неправильно свернутый белок распознается убиквитинлигазами, убиквитинатинилируется, ретротранслоцируется в цитозоль и расщепляется протеасомой [37]. Например, LRR-RLK BRASSINOSTEROID-INSENSITIVE1, который содержит несколько сайтов N-гликозилирования [58], является такой N-гликан-зависимой мишенью ERAD [59,60].

Поскольку слитые белки FER, NTA и LRE не показали каких-либо изменений в количестве или локализации белка в tun мутантных семязачатках, эффект на ANX1-YFP и ANX2-YFP, по-видимому, является специфическим для пыльцы эффектом, а не общей потерей гликозилированных белков в растении. Специфичность ERAD описана для LRR-RLKs EFR и FLAGELLIN-SENSITIVE2 (FLS2), участвующих в врожденном иммунитете растений [61]. Оба LRR-RLK являются N-гликозилированными мембранными белками, но мутации в двух членах пути контроля качества ER повлияли только на EFR, но не на FLS2 [61].Точно так же близкородственные Cr RLK1Ls FER, ANX1 и ANX2 могут быть неправильно гликозилированы у мутанта tun , но только ANX1/2 деградируют по пути ERAD, что объясняет отсутствие ANX1/2-YFP, но нормальное обилие FER-GFP. Это также объясняет разницу в пенетрантности мужских и женских гаметофитных фенотипов; хотя FER, вероятно, неправильно гликозилирован, он все еще локализован в FA, тем самым обеспечивая успешный прием PT в определенной степени, что согласуется с остаточной передачей tun через FG.Напротив, ANX1/2 разрушаются путем ERAD, что приводит к полностью пенетрантному anx1/2 -подобному фенотипу и полному отсутствию передачи через пыльцу.

Выводы

Характеристика TUN и EVN показала, что N-гликозилирование белка важно для различных процессов развития. Нарушение рецепции PT и anx1/2 -подобный разрыв PT у мутантов tun , по-видимому, связаны с неправильно гликозилированным FER и ANX1/2, соответственно, наиболее близкими членами подсемейства Cr RLK1L RLK.Дефекты рецепции PT, наблюдаемые у гликозилированных мутантов tun и evn , дают первое указание на то, что у растений развились сходные механизмы для обеспечения оплодотворения, как и у млекопитающих, где взаимодействия N-гликан-белок и белок-белок, по-видимому, действуют синергетически, чтобы гарантировать связывание гамет и, таким образом, увеличивает вероятность успешного оплодотворения.

Материалы и методы

Растительный материал и условия роста

Условия выращивания растений соответствовали описанию [62].Линии вставок Т-ДНК были получены из Ноттингемского Arabidopsis Stock Center (NASC). Мутант qrt1-2/qrt1-2 [26] был подарен Дж. Ф. Харпером (Университет Невады, Рино). Линии pACA9::ANX1-YFP , pACA9::ANX2-YFP , pFER::FER-GFP и pNTA::NTA-GFP описаны ранее [12,16,20]. Скрещивания проводили путем кастрации цветочных почек Col-0 дикого типа, tun/TUN и evn/EVN с последующим опылением соответствующей пыльцой 2 DAE.Идентификация аллелей EMS, процедуры клонирования, генотипирование и анализ экспрессии генов описаны в тексте S1.

Окрашивание анилиновым синим

Для визуализации PT были выбраны стручковые волокна около 2 DAP. Чашелистики и лепестки удаляли, а стручки фиксировали в смеси 9:1 этанол (EtOH):уксусная кислота в течение ночи при 4°C. Окрашивание анилиновым синим было описано ранее [10], а анализ образцов проводили с использованием эпифлуоресцентного микроскопа Leica DM6000B. Каллозное окрашивание полутонких срезов семязачатка описано в тексте S1.

Анализ прорастания пыльцы in vitro

Прорастание пыльцы in vitro было описано ранее [14]. Пыльцевые зерна и пробирки визуализировали с помощью дифференциального интерферирующего контраста на микроскопе Leica DM6000B.

FM4-64 Окрашивание мембран

Пестики дикого типа

, tun-2/TUN и evn-3/EVN вырезали в охлажденном на льду 100 мМ растворе красителя FM4-64 (Life Technologies) на предметных стеклах микроскопа, а семязачатки покрывали покровным стеклом. .Предметные стекла микроскопа накрывали алюминиевой фольгой и оставляли на льду на 3–4 часа. Флуоресценцию мембран семяпочек анализировали с помощью конфокального микроскопа Leica SP5.

Очистка яйцеклеток

Цветочные почки

кастрировали и собирали 2 DAE, разрезали по бокам в продольном направлении и фиксировали в смеси 9:1 EtOH:уксусная кислота в течение ночи при 4°C. Образцы промывали в серии EtOH (85%, 70%, 50% и 30% в течение 30 минут каждый) и осветляющем растворе (хлоралгидрат:глицерин:вода (8:1:2, вес:об:об)) добавлен.Силикаты разрезали, а семязачатки анализировали с использованием микроскопа Leica DMR.

Окрашивание β-глюкуронидазой (GUS)

Синергидный маркер ET2634 [63] был скрещен с мутантами tun-1/TUN и evn-1/EVN . Гомозиготных особей F2 кастрировали, а стручковые волокна окрашивали на экспрессию GUS 2 DAE, как описано ранее [20]. Окрашенные образцы препарировали и анализировали с помощью микроскопа Leica DMR.

Вестерн-блоттинг и анализ дегликозилирования

Экстракция белка из 10-дневных проростков (приблизительно 400 растений дикого типа, tun-2/TUN и evn-3/EVN , несущих pFER::FER-GFP и ost3/6 -2 (SALK_067271)) проводили путем их измельчения в мешалке с добавлением буфера для экстракции (50 мМ трис, pH 7.5, 10 мМ NaCl, 0,5% Triton X-100 и таблетку коктейля ингибиторов протеазы Complete Mini (Roche)). Экстракты инкубировали на льду в течение 15 мин и центрифугировали в течение 3 мин при 14000 об/мин (центрифуга Eppendorf 5424 с FA-45-24-11). Белковые экстракты кипятили при 95°C с буфером для загрузки SDS (63 мМ Tris-HCl (pH = 6,8), 15% глицерина, 2% SDS, 0,15% бромфенолового синего, 7 мМ DTT) и наносили на 10%-й гель с последующим SDS-PAGE в восстанавливающих условиях. После блоттинга на мембрану PVDF (Millipore Immobilon Transfer Membrane) мембрану блокировали в 5% молоке в TBST (20 мМ Трис (pH = 7.4), 150 мМ NaCl, 0,05% Tween-20), и зондировали антителом против GFP B-2 (Santa Cruz Biotech), промывали TBST, обрабатывали вторичным антителом (козье антимышиное, конъюгированное с пероксидазой хрена [Pierce] ) и обнаруживают с помощью хемилюминесценции (SuperSignal West Dura [ThermoScientific]). Для обнаружения ConA (Sigma-Aldrich) гель SDS наносили на мембрану PVDF и маркировали в соответствии с рекомендациями производителя. Для оценки количества белка восстанавливающий SDS-гель окрашивали раствором кумасси бриллиантового синего R250 (Fluka) (0.1% кумасси, 10% ледяной кислоты, 40% метанола) и обесцвечивают раствором для обесцвечивания (20% метанол, 10% уксусная кислота). Расщепление EndoH (New England Biolabs) проводили в соответствии с инструкциями производителя в восстанавливающих условиях.

Конфокальная микроскопия

Конфокальная микроскопия была описана ранее [20], за исключением того, что использовался конфокальный микроскоп Leica SP5.

Лечение кифунензином

Целые соцветия

срезали с растения и инкубировали в 50 мкМ растворе Kif (Sigma-Aldrich).Через 2 сут при постоянном освещении при 22°С флуоресценцию зрелых пыльцевых зерен анализировали с помощью конфокального микроскопа Leica SP5.

Eeyarestatin I Лечение

Пыльники цветочных почек (около 11 стадии) вскрывали и пыльцевые зерна помещали на среду для прорастания пыльцы [14], содержащую различные концентрации EerI (Sigma). Пыльцу инкубировали в течение 20 ч при 22°С во влажном инкубационном боксе. Флуоресценцию пыльцевых зерен анализировали с помощью конфокального микроскопа Leica SP5.

Вспомогательная информация

S1 Рис. Дополнительные аллели подтверждают женский и мужской гаметофитные фенотипы.

(A–D) Окрашивание анилиновым синим каллозы в клеточных стенках PT 2 DAP. (A) Нормальный прием PT в FG дикого типа. (B-D) Избыточный рост PT в tun-2 (B), evn-2 (C) и evn-3 мутантных FG (D). Звездочками отмечен фенотип чрезмерного роста PT. (E–H) Анализ прорастания пыльцы in vitro. (E) Нормальное прорастание пыльцы дикого типа. (F) Фенотип взрыва PT в tun-2/TUN;qrt/qrt .Стрелки указывают разрывные ПТ. (G) Дегенерированный фенотип пыльцы в evn-2/EVN;qrt/qrt . (H) Дегенерированный фенотип пыльцы в evn-3/EVN;qrt/qrt . Стрелки указывают на выродившуюся пыльцу. Шкала баров: 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s001

(PDF)

S2 Рис. Морфология синергид сходна в зародышевых мешках дикого типа,

tun-2 и evn-3 .

(A–B) Окрашивание FM4-64 мембран семязачатков (пестики 2 DAE).(A) Яйцеклетка с нормальными синергидными клетками. (B) Семяпочка дикого типа с косо ориентированными синергидными клетками. Сокращения: CC: центральная клетка, EC: яйцеклетка, Sy: синергидная клетка, FA: нитевидный аппарат. (C) Количественная оценка двух морфологических типов в семязачатках дикого типа, tun-2/TUN и evn-3/EVN .

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s002

(PDF)

S3 Рис. Отложение каллозы в семязачатках

tun и evn не связано с активацией защитных реакций растений.

ОТ-ПЦР ЗАЩИТА РАСТЕНИЙ1 . 2 ( PDF1 ( PDF1 . 2 . 2 ). ( PAL1 ), участвующий в реакции салициловой кислоты, в evn-1/EVN , tun-1/TUN , evn-2/EVN и пестиках дикого типа 2 DAE, и в контроль рассады.Цифры справа указывают количество циклов амплификации. ACTIN11 служит для контроля экспрессии.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s003

(PDF)

S4 Рис. Окрашивание по Александеру и DAPI выявило различные фенотипы пыльцы в

tun и evn мутантных пыльцевых зернах.

(A–C) Окрашивание по Александеру зрелых кварт/кварт (A), tun-1/TUN; кварт/кварт (B) и evn-1/EVN; кварт/кварт пыльцевых тетрад ( С).(D – F) Окрашивание DAPI ДНК в зрелых qrt/qrt контрольных (D), tun-1/TUN; qrt/qrt (E) и evn-1/EVN; qrt/qrt пыльцевых тетрад (Ф). (G) Окрашивание DAPI ДНК на четвертой стадии (двуклеточная и ранняя трехклеточная пыльца), третьей стадии (трехклеточная пыльца) и второй стадии (поздняя трехклеточная и ранняя зрелая пыльца) evn-1/EVN; qrt/qrt мутантных тетрад. Шкала баров: 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s004

(PDF)

S5 Рис.Реципрокные скрещивания показывают, что фенотип чрезмерного роста PT обусловлен дефектом женского гаметофита.

(A–D) Окрашивание анилиновым синим каллозы в PT и клеточных стенках семязачатка 2 DAP. (A) Яйцеклетка Col-0, опыленная пыльцой tun-1/TUN . (B) tun -1 мутантная семяпочка, опыленная пыльцой Col-0. (C) Семяпочка Col-0, опыленная пыльцой evn-1/EVN . (D) evn -1 мутантная семяпочка, опыленная пыльцой Col-0. Звездочки указывают на фенотип чрезмерного роста PT. Шкала баров: 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s005

(PDF)

S6 Рис. Вызывающая мутация EMS в

evn-1 локализуется в нижнем плече хромосомы III и разрушает ген At3g45040 .

Соотношение гетерозиготных SNP в зависимости от их положения в хромосоме. Красная пунктирная линия указывает соотношение 0,5, где ожидается причинный SNP. Зеленая пунктирная линия отмечает соотношение 0,25, где должны располагаться несвязанные SNP. Красная рамка указывает на сцепленную и выбранную область на нижнем плече хромосомы III около At3g45040 .Серые прямоугольники отмечают центромерные области с плохим качеством картирования. Стрелка указывает на причинный SNP с коэффициентом сегрегации 0,5 в пуле мутантных особей. Коэффициент сегрегации аллеля evn-1 был ожидаемым из-за высокого охвата последовательностей 130 прочтений.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s006

(PDF)

S7 Рис. Вызывающая мутация EMS в

evn-2 локализуется в нижнем плече хромосомы III и разрушает ген At3g45040 .

Соотношение гетерозиготных SNP в зависимости от их положения в хромосоме. Красная пунктирная линия указывает соотношение 0,5, где ожидается причинный SNP. Зеленая пунктирная линия отмечает соотношение 0,25, где должны располагаться несвязанные SNP. Красная рамка указывает на сцепленную и выбранную область на нижнем плече хромосомы III около At3g45040 . Серые прямоугольники отмечают центромерные области с плохим качеством картирования. Стрелка указывает на причинный SNP с коэффициентом сегрегации, равным 0.3 в пуле мутантов. Коэффициент сегрегации аллелей evn-2 был ниже, чем ожидалось, из-за плохого охвата последовательностей (см. текст S1).

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s007

(PDF)

S8 Рис. Трансляционные слияния TUN-GFP и EVN-GFP расположены в эндоплазматическом ретикулуме (ER).

(A–E) Анализ с помощью конфокальной микроскопии флуоресцентных слитых белков. (A–C) Экспрессия pTUN::TUN-GFP в женском гаметофите (A) и синергидах (B) 2 DAE, а также в PT (C).(D) p35S::TUN-GFP (левая панель) и p35S::ER-rk (средняя панель) в временно трансформированных клетках эпидермиса лука, объединенные каналы (правая панель). (E) p35S::EVN-GFP (левая панель) и p35S::ER-rk (средняя панель) во временно трансформированных клетках эпидермиса табака, слитые каналы (правая панель).

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s008

(PDF)

S9 Рис.

Линии TUN(RNAi) и EVN(RNAi) демонстрируют пониженную экспрессию генов.

(A) Анализ экспрессии qRT-PCR TUN в четырех независимых линиях RNAi . Соответствующее количество карликовых особей на линию (16 растений) указано ниже. (B) Анализ экспрессии qRT-PCR EVN в четырех независимых линиях RNAi .

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s009

(PDF)

S10 Рис. FER-GFP в линиях

RNAi(TUN) не полностью дегликозилирован.

Вестерн-блот-анализ белка FER-GFP из контрольных и проростков TUN(RNAi) с использованием антител против GFP.Окрашенный кумасси SDS-PAGE (внизу) служит контролем количества загруженного белка. Звездочкой отмечен полностью N-дегликозилированный FER-GFP после обработки белкового экстракта дегликозилазой EndoH.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s010

(PDF)

S11 Рис. Репортеры FER-GFP, NTA-GFP и LRE-Citrine не различаются между пестиками дикого типа,

tun-2/TUN и evn-3/EVN .

(A) Количественная оценка локализации гомозиготного репортера FER-GFP в семяпочках дикого типа, tun-2/TUN и evn-3/EVN (пестики 2 DAE).Примечание: учитывались только флуоресцентные семязачатки. (B) Количественная оценка локализации гемизиготного репортера NTA-GFP в семяпочках дикого типа, tun-2/TUN и evn-3/EVN (пестики 2 DAE). Примечание. Не все яйцеклетки отображают репортерную экспрессию. (C) Количественная оценка локализации гомозиготного репортера LRE-Citrine в семязачатках дикого типа и evn-3/EVN (пестики 2 DAE).

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s011

(PDF)

S12 Рис.Обработка Eeyarestatin I пыльцы

tun-2/TUN приводит к частичному восстановлению флуоресценции ANX1-YFP.

Относительное содержание белка ANX1-YFP в пыльце tun-2/TUN после обработки различными концентрациями ингибитора ERAD EerI. Подсчитано пыльцевых зерен: 5 мкМ: n = 76; 10 мкМ: н = 222; 15 мкМ: н = 160; 20 мкМ: н = 265; 30 мкМ: н = 147; 50 мкМ: n = 256,

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s012

(PDF)

S13 Рис. Нуклеазный расщепление Surveyor секвенированных образцов

evn-1 и evn-2 .

Область SNP гена At3g45040 была амплифицирована из каждого из 94 и 60 образцов ДНК, которые были объединены для секвенирования из evn-1 и evn-2 соответственно, и двух контролей Col-0. Продукты ПЦР расщепляли нуклеазой SURVEYOR, расщепляющей несовпадения одиночных пар оснований в гетеродуплексной ДНК [64].В evn-1 непереваренная полоса дикого типа составляет 1000 п.н., тогда как любой образец, содержащий SNP, имеет непереваренную полосу в 1000 п.н. и два продукта переваривания около 800 п.н. и 200 п.н. У особей шесть и семь есть только полоса дикого типа, и было показано, что это ошибки выборки. В evn-2 непереваренная полоса дикого типа составляет 900 п.н., тогда как любой образец, содержащий SNP, имеет непереваренную полосу в 900 п.н. и два продукта переваривания около 500 п.н. и 400 п.н. Результаты для tun-1 были опубликованы ранее [28].

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002139.s013

(PDF)

Благодарности

Мы благодарим Майкла Т. Райссига за критическое прочтение рукописи, Джеффа Харпера за семена, Маркуса Эби за полезные обсуждения, Валерию Гальярдини за экспериментальную помощь во время пересмотра, Кристофа Эйхенбергера, Артуро Боланьоса, Валерию Гальярдини, Даниэлу Гуторл и Питера Копфа за общую лабораторную работу. поддержку, а также Кристиана Фрея и Карла Хувилера за техническое обслуживание теплиц.

Авторские взносы

Задумал и спроектировал эксперименты: HL SAK UG. Выполняли эксперименты: HL LMM HSA. Проанализированы данные: HL LMM SAK ABD UG. Написал статью: HL UG. Инициатор и куратор проекта: У.Г.

Каталожные номера

  1. 1.
    Дрессельхаус Т., Франклин-Тонг Н. (2013)Перекрестные помехи между мужчинами и женщинами во время прорастания пыльцы, роста трубок и направления, а также двойного оплодотворения. Мол завод 6: 1018–1036. пмид:23571489
  2. 2.
    Palanivelu R, Brass L, Edlund AF, Preuss D (2003)Рост и направление пыльцевых трубок регулируются POP2 , геном Arabidopsis , который контролирует уровни ГАМК.Ячейка 114: 47–59. пмид:12859897
  3. 3.
    Prado AM, Colaco R, Moreno N, Silva AC, Feijo JA (2008)Нацеливание пыльцевых трубок на семязачатки зависит от передачи сигналов оксида азота (NO). Мол завод 1: 703–714. пмид:19825574
  4. 4.
    Okuda S, Tsutsui H, Shiina K, Sprunck S, Takeuchi H (2009)Дефенсин-подобные полипептиды LURE представляют собой аттрактанты пыльцевых трубок, секретируемые синергидными клетками. Природа 458: 357–361. пмид:19295610
  5. 5.
    Канаока М.М., Кавано Н., Мацубара Ю., Сусаки Д., Окуда С. и др.(2011) Идентификация и характеристика TcCRP1 , аттрактанта пыльцевых трубок из Torenia concolor . Энн Бот 108: 739–747. пмид:21546430
  6. 6.
    Takeuchi H, Higashiyama T (2012) Видоспецифичный кластер дефенсин-подобных генов кодирует диффузные аттрактанты пыльцевых трубок в Arabidopsis . PLoS Биол 10: e1001449. пмид:23271953
  7. 7.
    Лю Дж., Чжун С., Го С., Хао Л., Вэй С. и др. (2013) Связанные с мембраной RLCKs LIP1 и LIP2 являются важными мужскими факторами, контролирующими влечение самцов к самкам у Arabidopsis .Курр Биол 23: 993–998. пмид:23684977
  8. 8.
    Leshem Y, Johnson C, Sundaresan V (2013) Вхождение пыльцевой трубки в синергидную клетку Arabidopsis наблюдается в месте, отличном от нитевидного аппарата. Завод Репродукт 26: 93–99. пмид:23686222
  9. 9.
    Нго К.А., Фоглер Х., Литуев Д.С., Несторова А., Гроссниклаус У. (2014)Диалог кальция, опосредованный путем передачи сигнала FERONIA , контролирует доставку спермы растений. Ячейка разработчиков 29: 491–500.пмид:24814317
  10. 10.
    Huck N, Moore JM, Federer M, Grossniklaus U (2003) Мутант Arabidopsis feronia нарушает женский гаметофитный контроль рецепции пыльцевых трубок. Развитие 130: 2149–2159. пмид:12668629
  11. 11.
    Lindner H, Müller LM, Boisson-Dernier A, Grossniklaus U (2012) Cr Киназы, подобные рецептору RLK1L: не просто еще один кирпич в стене. Curr Opin Plant Biol 15: 659–669. пмид:22884521
  12. 12.Escobar-Restrepo JM, Huck N, Kessler S, Gagliardini V, Gheyselinck J, et al. (2007) Киназа, подобная рецептору FERONIA, опосредует взаимодействие самцов и самок во время рецепции пыльцевых трубок. Наука 317: 656–660. пмид:17673660
  13. 13.
    Ротман Н., Розье Ф., Боавида Л., Дюма С., Бергер Ф. и др. (2003) Самка контролирует доставку мужских гамет во время оплодотворения у Arabidopsis thaliana . Curr Biol 13: 432–436. пмид:12620194
  14. 14.
    Буассон-Дернье А., Рой С., Крицас К., Гробей М.А., Ячубек М. и соавт.(2009) Нарушение экспрессии пыльцы FERONIA гомологов ANXUR1 и ANXUR2 вызывает выброс пыльцевых трубок. Развитие 136: 3279–3288. пмид:19736323
  15. 15.
    Миядзаки С., Мурата Т., Сакураи-Озато Н., Кубо М., Демура Т. и др. (2009) ANXUR1 и 2 , родственные гены FERONIA/SIRENE , являются мужскими факторами координированного оплодотворения. Курр Биол 19: 1327–1331. пмид:19646876
  16. 16.
    Буассон-Дернье А., Литуев Д.С., Несторова А., Франк С.М., Тиругнанараджа С. и соавт.(2013) Киназы, подобные рецептору ANXUR, координируют целостность клеточной стенки с ростом на кончике пыльцевой трубки посредством NADPH-оксидаз. PLoS Биол 11: e1001719. пмид:24302886
  17. 17.
    Дуан К., Кита Д., Джонсон Э.А., Аггарвал М., Гейтс Л. и др. (2014) Активные формы кислорода опосредуют разрыв пыльцевой трубки с высвобождением сперматозоидов для оплодотворения у Arabidopsis . Нац.коммуна 5: 3129. pmid:24451849
  18. 18.
    Haruta M, Sabat G, Stecker K, Minkoff BB, Sussman MR (2014) Пептидный гормон и его рецепторная протеинкиназа регулируют расширение растительных клеток.Наука 343: 408–411. пмид:24458638
  19. 19.
    Capron A, Gourgues M, Neiva LS, Faure JE, Berger F, et al. (2008) Материнский контроль доставки мужских гамет у Arabidopsis включает предполагаемый GPI-заякоренный белок, кодируемый геном LORELEI . Растительная клетка 20: 3038–3049. пмид:1

    64

  20. 20.
    Кесслер С.А., Шимосато-Асано Х., Кейнат Н.Ф., Вуэст С.Е., Инграм Г. и др. (2010)Консервативные молекулярные компоненты для рецепции пыльцевых трубок и грибковой инвазии.Наука 330: 968–971. пмид:21071669
  21. 21.
    Буассон-Дернье А., Фрич С., Ким Т.Х., Дизон М.Б., Шредер Дж.И. (2008) Мутация потери функции пероксина воздержание по взаимному согласию нарушает распознавание мужского и женского гаметофитов. Курр Биол 18: 63–68. пмид:18160292
  22. 22.
    Лейдон А.Р., Бил К.М., Воронецка К., Кастнер Э., Чен Дж. и др. (2013) Три транскрипционных фактора MYB контролируют дифференцировку пыльцевых трубок, необходимую для высвобождения сперматозоидов. Курр Биол 23: 1209–1214.пмид:237
  23. 23.
    Лян Ю., Тан З.М., Чжу Л., Ниу К.К., Чжоу Дж.Дж. и др. (2013) MYB97 , MYB101 и MYB120 действуют как мужские факторы, которые контролируют взаимодействие пыльцевой трубки и синергид при оплодотворении Arabidopsis thaliana . PLoS Genet 9: e1003933. пмид:24278028
  24. 24.
    Герхард Э. (1847) Über die Gottheiten der Etrusker. Druckerei der Königlichen Akademie der Wissenschaften, Берлин.
  25. 25.
    Nishimura MT, Stein M, Hou B-H, Vogel JP, Edwards H, et al.(2003) Потеря синтазы каллозы приводит к устойчивости к салициловой кислоте. Наука 301: 969–972. пмид:12

    0

  26. 26.
    Preuss D, Rhee SY, Davis RW (1994) Тетрадный анализ возможен в Arabidopsis с мутацией генов QUARTET ( QRT ). Наука 264: 1458–1460. пмид:8197459
  27. 27.
    Rhee SY, Osborne E, Poindexter PD, Somerville CR (2003) Разделение микроспор в квартете 3 мутантов Arabidopsis нарушено из-за дефекта регулируемой в процессе развития полигалактуроназы, необходимой для деградации материнской клеточной стенки пыльцы.Завод Физиол 133: 1170–1180. пмид:14551328
  28. 28.
    Lindner H, Raissig MT, Sailer C, Shimosato-Asano H, Bruggmann R, et al. (2012) Картирование отношения SNP (SRM): выявление летальных аллелей и мутаций в сложных генетических фонах с помощью секвенирования следующего поколения. Генетика 191: 1381–1386. пмид:22649081
  29. 29.
    Канехара К., Чо Ю., Линь Ю.С., Чен С.Э., Ю С.Ю. и др. (2015) Arabidopsis DOK1 кодирует функциональную долихолкиназу, участвующую в репродукции.Завод J 81: 292–303. пмид:25406445
  30. 30.
    Aebi M (2013)Гликозилирование N-связанного белка в ER. BBA — Molecular Cell Research 1833: 2430–2437. пмид:23583305
  31. 31.
    Фарид А., Малиновский Ф.Г., Вейт С., Шоберер Дж., Зипфель С. и другие. (2013) Специализированная роль консервативной субъединицы OST3/6 олигосахарилтрансферазного комплекса во врожденном иммунитете и толерантности к абиотическим стрессам. Завод Физиол 162: 24–38. пмид:23493405
  32. 32.
    Guo H, Li L, Ye H, Yu X, Algreen A, et al.(2009) Три родственные рецептороподобные киназы необходимы для оптимального удлинения клеток у Arabidopsis thaliana . Proc Natl Acad Sci USA 106 : 7648–7653. пмид:19383785
  33. 33.
    Хелениус А., Эби М. (2001) Внутриклеточные функции N-связанных гликанов. Наука 291: 2364–2369. пмид:11269317
  34. 34.
    Хавекер Х., Рипс С., Койва Х., Саломон С., Сайджо Ю. и др. (2010) Рецепторы распознавания образов требуют N-гликозилирования для обеспечения иммунитета растений.J Biol Chem 285: 4629–4636. пмид:20007973
  35. 35.
    Heller L, Orlean P, Adair WL (1992) Клетки Saccharomyces cerevisiae sec59 лишены активности долихолкиназы. Proc Natl Acad Sci USA 89: 7013–7016. пмид:1323123
  36. 36.
    Griesbeck O, Baird GS, Campbell RE, Zacharias DA, Tsien RY (2001) Снижение чувствительности желтого флуоресцентного белка к окружающей среде. Механизм и приложения. J Biol Chem 276: 29188–29194. пмид:11387331
  37. 37.Хюттнер С., Штрассер Р. (2012)Расщепление гликопротеинов в растениях, связанное с эндоплазматическим ретикулумом. Front Plant Sci 3: 67. pmid:22645596
  38. 38.
    Tokunaga F, Brostrom C, Koide T, Arvan P (2000) Связанная с эндоплазматическим ретикулумом (ER) деградация неправильно свернутых N-связанных гликопротеинов подавляется при ингибировании ER маннозидазы I. J Biol Chem 275: 40757–40764. пмид:10984471
  39. 39.
    Ван К., Шинкре Б.А., Ли Дж., Венигер М.А., Лю Ю и др. (2010) Ингибитор ERAD Eeyarestatin I представляет собой бифункциональное соединение с мембраносвязывающим доменом и ингибирующей группой p97/VCP.ПЛОС ОДИН 5:e15479. пмид:21124757
  40. 40.
    Хелениус А., Эби М. (2004)Роли N-связанных гликанов в эндоплазматическом ретикулуме. Annu Rev Biochem 73: 1019–1049. пмид:15189166
  41. 41.
    Bause E (1983) Структурные требования N-гликозилирования белков. Исследования с пролиновыми пептидами в качестве конформационных зондов. Биохим Дж. 209: 331–336. пмид:6847620
  42. 42.
    Ферро-Новик С., Новик П., Филд С., Шекман Р. (1984) Секреторные мутанты дрожжей, которые блокируют образование активных ферментов клеточной поверхности.J Cell Biol 98: 35–43. пмид:6368571
  43. 43.
    Allen CM, Kalin JR, Sack J, Verizzo D (1978) CTP-зависимое фосфорилирование долихола гомогенатами клеток млекопитающих. Биохимия 17: 5020–5026. пмид:214107
  44. 44.
    Rush JS, Cho SK, Jiang S, Hofmann SL, Waechter CJ (2002)Идентификация и характеристика кДНК, кодирующей долихилпирофосфатфосфатазу, расположенную в эндоплазматическом ретикулуме клеток млекопитающих. J Biol Chem 277: 45226–45234. пмид:12198133
  45. 45.Fernandez F, Shridas P, Jiang S, Aebi M, Waechter CJ (2002)Экспрессия и характеристика кДНК человека, которая дополняет чувствительный к температуре дефект активности долихолкиназы в мутанте дрожжей sec59-1 : ферментативное фосфорилирование долихола и диацилглицерин катализируются отдельными CTP-опосредованными киназными активностями в Saccharomyces cerevisiae . Гликобиология 12: 555–562. пмид:12213788
  46. 46.
    Bernstein M, Kepes F, Schekman R (1989) Sec59 кодирует мембранный белок, необходимый для гликозилирования ядра в Saccharomyces cerevisiae .Мол Селл Биол 9: 1191–1199. пмид:2657387
  47. 47.
    Кранц С., Юнгеблут С., Денеке Дж., Эрлекотте А., Зольбах С. и др. (2007) Нарушение биосинтеза долихолфосфата вызывает новое наследственное заболевание со смертью в раннем младенчестве. Am J Hum Genet 80: 433–440. пмид:17273964
  48. 48.
    Huffaker TC, Robbins PW (1982)Температурно-чувствительные мутанты дрожжей с дефицитом гликозилирования, связанного с аспарагином. J Biol Chem 257: 3203–3210. пмид:7037780
  49. 49.
    Couto JR, Huffaker TC, Robbins PW (1984)Клонирование и экспрессия в Escherichia coli дрожжевой маннозилтрансферазы из пути гликозилирования, связанного с аспарагином.J Biol Chem 259: 378–382. пмид:6368538
  50. 50.
    Gao XD, Nishikawa A, Dean N (2004)Физические взаимодействия между Alg1 , Alg2 и Alg11 маннозилтрансфераз эндоплазматического ретикулума. Гликобиология 14: 559–570. пмид:15044395
  51. 51.
    Олбрайт К.Ф., Роббинс Р.В. (1990)Последовательность и гетерогенность транскрипта дрожжевого гена ALG1 , важной маннозилтрансферазы, участвующей в N-гликозилировании. J Biol Chem 265: 7042–7049.пмид: 2182636
  52. 52.
    Паттисон Р.Дж., Амтманн А. (2009)Продукция N-гликанов в эндоплазматическом ретикулуме растений. Тенденции Plant Sci 14: 92–99. пмид:125
  53. 53.
    Schallus T, Jaeckh C, Fehér K, Palma AS, Liu Y, et al. (2008)Малектин: новый углеводсвязывающий белок эндоплазматического ретикулума и кандидат на участие в ранних стадиях N-гликозилирования белка. Мол Биол Ячейка 19: 3404–3414. пмид:18524852
  54. 54.
    Galli C, Bernasconi R, Soldà T, Calanca V, Molinari M (2011) Малектин участвует в резервном пути контроля качества гликопротеина в ER млекопитающих.ПЛОС ОДИН 6: e16304. пмид:21298103
  55. 55.
    Clark GF (2010)Zona pellucida млекопитающих: матрица, которая опосредует как связывание гамет, так и иммунное распознавание? Syst Biol Reprod Med 56: 349–364. пмид:20662591
  56. 56.
    Вассарман П.М., Литчер Э.С. (2008)Оплодотворение млекопитающих: многофункциональная блестящая оболочка яйца. Int J Dev Biol 52: 665–676. пмид:18649280
  57. 57.
    Кларк Г.Ф. (2011)Молекулярные модели связывания сперматозоидов и ооцитов мыши. Гликобиология 21: 3–5.пмид:21188842
  58. 58.
    Li J, Chory J (1997) Предполагаемая богатая лейцином киназа рецептора повторов, участвующая в передаче сигнала брассиностероидов. Ячейка 90: 929–938. пмид:9298904
  59. 59.
    Hong Z, Jin H, Tzfira T, Li J (2008)Множественный механизм, опосредованный сохранением дефектного рецептора брассиностероидов в эндоплазматическом ретикулуме Arabidopsis . Растительная клетка 20: 3418–3429. пмид:1

    10

  60. 60.
    Hong Z, Jin H, Fitchette AC, Xia Y, Monk AM (2009)Мутации α1 , 6 маннозилтрансферазы ингибируют связанную с эндоплазматическим ретикулумом деградацию дефектных рецепторов брассиностероидов в Arabidopsis .Растительная клетка 21: 3792–3802. пмид:20023196
  61. 61.
    Ли Дж., Чжао-Хуэй С., Бату М., Некрасов В., Ру М. и др. (2009)Конкретные компоненты контроля качества ER, необходимые для биогенеза растительного рецептора врожденного иммунитета EFR. Proc Natl Acad Sci USA 106: 15973–15978. пмид:19717464
  62. 62.
    Raissig MT, Bemer M, Baroux C, Grossniklaus U (2013)Геномный импринтинг у эмбриона Arabidopsis частично регулируется PRC2. PLoS Genet 9: e1003862. пмид:24339783
  63. 63.Грос-Хардт Р., Кеги С., Бауманн Н., Мур Дж. М., Баскар Р. и др. (2007) LACHESIS ограничивает судьбу гаметных клеток в женском гаметофите Arabidopsis . PLoS Биол 5: e47. пмид:17326723
  64. 64.
    Till BJ, Burtner C, Comai L, Henikoff S (2004)Расщепление несоответствия одноцепочечными специфическими нуклеазами. Нуклеиновые кислоты Рез. 32: 2632–2641. пмид:15141034

Мерт Туран — Музыка для интервью куратора

1/ Итак, во-первых, сообщите нам свое имя, город и страну и чем вы сейчас зарабатываете на жизнь?

Мерт Туран — Музыка куратору

Привет, я Мерт, я живу в Анкаре, изучаю философию в Ближневосточном Техническом Университете и работаю на Радио ОДТУ 103.1 в должности начальника производства.

2/ Это то, что вы всегда хотели сделать? Что вам в этом нравится?

Наверное, я всегда безумно любил создавать плейлисты. Поскольку я услышал такую ​​чертовски уникальную мелодию, я хочу услышать больше и поискать похожие мелодии. Это похоже на одержимость, но знаешь, я ничего не могу поделать. Что мне так нравится, так это то, что я могу быть там, где я хочу быть безоговорочно, когда я включаю плейлист. Это помогает мне сходить с рук, особенно когда я действительно облажался.Это прекрасно.

3/ Расскажите нам о своем первом музыкальном воспоминании – почему вы думаете, что помните его?

Мое первое музыкальное воспоминание связано с Шакирой. В те времена она была на вершине тройки, а я был 5-летним ребенком. Laundry Service только что вышел, и это был такой альфа-альбом. Помню, я все время слушал ее. Думаю дело в интенсивности звука. Это означало что-то теплое для меня, чтобы вспомнить.

4/ Для кого вы сделали свой первый микстейп/плейлист? Каков был результат?

Я был крутым подростком.Я хотел, чтобы каждая песня была моей. Раньше у меня было чувство собственности. Ну, я до сих пор иногда это делаю… Я копал и открывал для себя новые звуки, поэтому на самом деле я сделал свой первый плейлист для себя, то есть для моего собственного блага и здравомыслия.

5/ Что заставило вас выйти в Интернет и искать информацию о кураторстве музыки?

Пока я проходил стажировку в Musicto, прошлым летом мы отлично провели время с Эндрю. Я узнал много нового об индустрии и многое другое. Эндрю спросил меня, могу ли я справиться с плейлистом на турецком языке.Это была первая идея плейлиста на иностранном языке, поэтому я с радостью ее принял.

6/ Расскажите нам о названии вашего плейлиста — откуда оно взялось?

Мой плейлист называется «Музыка для спасения Анатолии». Плейлист, который начинается от основателей первых музыкальных движений в современном понимании в Турции до начала тысячелетия, на самом деле является историей эволюции и изменений.

7/ Что должен сделать трек, чтобы он попал в ваш список, есть ли что-то особенное, что вы ищете?

Мой плейлист вообще никак не ограничен.Любой звук может занять место в Save Anatolia. Важно только то, что он должен отражать Анатолию такой, какая она есть. Не притворяясь. Если я чувствую эту атмосферу в какой-либо песне, я бы с удовольствием написал о ней и о том, какие чувства она у меня вызвала.

8/ Что может сделать артист при отправке своего трека в ваш список, чтобы убедиться, что вы послушаете его трек?

Артисты могут связаться со мной через раздел отправки трека на сайте. Это почти гарантированный способ убедиться, что я буду слушать ваши треки.Я хотел бы не торопиться и дать ему шанс.

9/ Мы знаем — они постоянно меняются — но на этой неделе — какие у вас 5 самых любимых треков за все время.

Ух, тяжело. Well…

  • Lazarus от David Bowie
  • Back Down South от Kings of Leon
  • How To Dissappear Completely от Radiohead
  • Follow The Cops Back Home от Placebo
  • American Dream от LCD Soundsystem

0 И, наконец, у кого из Music to Curator взять следующее интервью?

Вики из Music to Experience Urban Love Affairs должно быть следующим интервью, потому что это убийственное интервью и одна из моих любимых музыкальных композиций.

Следуйте за нами в социальных сетях:

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
    Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
    браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.
    Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie
потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

Турция: стамбульские хранители птиц соревнуются за идеальную мелодию

Душным стамбульским днем ​​около 60 мужчин сидят в зачарованной тишине в кафе, двери и окна которого плотно закрыты от уличного шума. Кроме звона чайных стаканов, единственные звуки, исходящие из таинственных замаскированных ящиков, поставленных перед публикой, — трели птичьего пения.
 
«Это зависимость, страсть, — сказал Метин Серткайя, один из участников древней, но малоизвестной городской традиции разведения вьюрков.
 
По выходным в начале лета мужчины, молодые и старые, из разных уголков Стамбула и из всех слоев общества собираются, чтобы стравить своих птиц друг с другом в певческих конкурсах.
 
В течение трех-четырех часов жюри оценивает до 100 птиц по силе, тональности, выразительности и продолжительности их мелодий. Клетки птиц держат закрытыми, чтобы свести к минимуму их уровень стресса или тревоги.
 
Для новичков излюбленной птицей является щегол (сака) – разговорчивый и простой в уходе, по мнению знатоков, но монотонный и предсказуемый в своем пении.
 
Тем не менее, большинство мужчин, собравшихся на недавнее соревнование в зеленом районе Пашабахче на азиатской стороне Стамбула, были хранителями зеленушек (флория) – более сложных для обучения пению, но и более мелодичных.
 
«Это птица, которая умеет подражать, мимикрировать, — объяснил Недим Касап, 60-летний торговец на пенсии, принимавший участие в конкурсе.
 
«Поскольку он подражает, он изменяет звук внутри себя и украшает его. . ». Касап продолжил. «Это как океан. Вы не сможете найти всего, что он прячет в себе, всего, что он прячет в своем мозгу.
 
Чтобы научить зеленушек петь, владельцы гуляют с ними в общественных местах — в основном, в парках и лесах на окраине города — и знакомят птиц с пением других птиц.
 
Иногда, если одна птица выработала особенно характерную или желанную мелодию, мужчины собираются вместе, чтобы побудить других птиц подражать ей.
 
Традиция является одним из наиболее необычных проявлений страсти к птицеводству, которая сильно распространена в турецком обществе.
 
Он также связан с одной исчезающей частью прошлого города.Хранители вьюрков обычно соглашаются, что они унаследовали свои традиции от старого этнического греческого меньшинства Стамбула, что является необычайно откровенным признанием в стране, где общие культурные традиции турок и греков часто становятся источником националистической напряженности.
 
«Мы узнали о зеленушке от греков, — признал Тамер Севим, 35-летний сторож зябликов из Пашабахче. «Греки разводили этих птиц, а армяне — тех, кого мы определяем как немусульман. После того, как они ушли, мы продолжали в том же духе и продолжаем сегодня.
 
Этнические греки Стамбула, численность которых в 1923 году составляла около 150 000 человек, в основном бежали из города в течение  20 века, особенно после жестокого погрома 1955 года. Сегодня в этом 15-миллионном мегаполисе осталось всего около 2 500 человек.
 
Наки Тез, режиссер, снявший в 2012 году документальный фильм о хранителях вьюрков, считает, что эта традиция дает представление о более разнообразной эпохе в истории Стамбула.
 
«Вы можете получить представление о том, каким был город раньше, и об отношениях между мусульманами, греками и армянами», — прокомментировал Тез.
 
«Они оба кормили птиц, покупали и продавали птиц друг у друга. Это были очень близкие отношения, в отличие от сегодняшнего дня. . ».
 
По оценкам хранителей вьюрков, около нескольких тысяч человек, всегда мужчин, до сих пор поддерживают эту традицию. Большинство узнало это от своих отцов в детстве.
 
Его соблюдение является полузаконным. Многие любители зябликов ловят своих птиц в дикой природе, что запрещено в Турции. Некоторые, однако, начали разводить вьюрков в неволе, чтобы соблюдать закон.
 
Но такие опасения не обескураживают преданных. Соревнования в Пашабахче в течение дня привлекли до 200 любителей зябликов. Некоторые принесли своих птиц для участия в соревнованиях; другие пришли просто послушать.
 
Однако большинство согласилось с тем, что традиция отмирает, поскольку молодые люди выбирают более современные развлечения.
 
Касап заявил, что знания о том, как ловить птиц, ухаживать за ними и дрессировать, постепенно исчезают. «Этого не следует делать так, как это делают некоторые здесь», — пожаловался он.«Никто на самом деле не пытается учиться».
 
Тем не менее, 26-летний Мурат Туран, медицинский техник и один из самых молодых участников кафе Paşabahçe, пытается учиться. Его дедушка впервые познакомил его с содержанием зябликов в возрасте шести лет.
 
Эта преданность окупилась. Птица Турана Муки заняла первое место в конкурсе. «Это прекрасно», — сказал он, неся большой золотой трофей и все еще закрытую птичью клетку к своей машине. «Это содержание зябликов — это . . . красивое хобби.

The Barça descarta уступка Burn Turan любой команде

ФК «Барселона» отрицал бы, что до января 2016 года он собирается уступить место «Сжечь Туран» «Галатасараю» ни какой-либо другой команде, поскольку Луис Энрике хотел бы, чтобы он был в составе с первой минуты, чтобы турецкий игрок адаптировался. самый быстрый

Билет | Gone in Supercopa of Europe: Barcelona vs Seville
Билет | Зашел за все стороны ФК Барселона

Как напечатала газета «Спорт», Луис Энрике призвал ФК Барселона отказаться от любой идеи уступить Burn Turan до января 2016 , потому что он хотел бы, чтобы турецкий игрок с минуты на одного больше, чем штатный culé, чтобы он адаптировал то, что раньше, к стилю игры в Барселоне и может купить настройку со своими товарищами в тренинги.В последние дни в Турции зашевелились, что Барса может принять уступку футболиста, так что туман и было минут, но, наконец, кажется, что это будет невозможно.

Предусмотрено, что Burn Turan соберется в следующий четверг с Луисом Энрике как раз перед тем, как в пятницу будет представлена ​​официальная форма с клубом Барселона. Футболист будет знать больше, чем спортивный проект астурийского техника лица на следующий сезон, а также планы, которые «Борьба» приготовила для него внутри команды.Цель, согласно каталонской газете, заключается в том, чтобы Burn Turan постепенно адаптировался к Барселоне, языку, его людям и динамике раздевалки culé.

Burn будет представлен в эту пятницу

Газета «Спорт» уверяет, что уже есть день и час для презентации Burn Turan как нового игрока ФК Барселона, и что в следующую пятницу будет четыре дня в установках Камп Ноу .Футболист, который в настоящее время заканчивает свои каникулы в Бодруме, возьмет курс на Барселону в этот четверг и воспользуется возможностью сделать традиционную фотографию у щита клуба.

Пятница, предусматривает, что он сделает соответствующие медицинские доказательства перед подписанием соглашения, а затем прыгнет на Камп Ноу для протокольной сессии фотографий , одетых в новое снаряжение, и первого контакта с болельщиками, которые перемещаются в Святилище Барселоны.

Add a comment

Ваш адрес email не будет опубликован.